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人源IgG文献资料
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人源性抗人FKBP52 IgG的表达和纯化
目的 将噬菌体抗体库中筛选到的抗52-kDa FK506结合蛋白(FKBP52)人源单链抗体(scFv)转换为完整人IgG并在真核细胞中表达.方法 噬菌体抗体库获得的5株抗人FKBP52-scFv,PCR扩增其轻重链可变区(VH/Vκ),利用同源重组技术将5对VH、Vκ拼接至分别包含有人K链及IgG1恒定区的真核表达载体pCMV/R-L、pCMV/R-H上,转染HEK293F细胞进行完整抗体表达,ELISA鉴定抗体活性,蛋白A柱分离纯化活性高的抗体,SDS-PAGE、Western blot法鉴定纯化后抗人FKBP52-IgG.结果 PCR及测序结果证实正确构建得到5对抗人FKBP52真核表达载体,转染HEK293F细胞后经ELISA鉴定均有完整抗体表达,对活性高的5号克隆进行抗体分离纯化,经SDS-PAGE及Western blot验证获得高纯度的特异性人源抗FKBP52-IgG.结论 成功将原核表达的抗人FKBP52-scFv转换为真核表达的完整人IgG.
