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4-戊基苯酚(4-AP)文献资料
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4-戊基苯酚单克隆抗体的制备及其可变区的同源建模
目的 制备4-戊基苯酚(4-AP)单克隆抗体(mAb),通过分子生物学方法对其可变区cDNA克隆和同源建模,为4-AP单链抗体制备及抗体分子层面改造奠定基础,同时为4-AP的免疫学检测提供一种新方法.方法 将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出F10阳性单抗细胞株.通过其mRNA的抽提,克隆出可变区cDNA序列,利用生物软件进行同源建模和分子对接.结果 在适条件下,其间接竞争ELISA (ic-ELISA)公式为y=A2+(A1-A2)/(1+(x/x0)p)(A1=1.28;A2=-0.07;x0=12 560.75;p =0.74),相关系数(R2)为0.997,其低检测限为0.65 μg/mL.mAb重链和轻链分别属于IgG1型和Kappa型,其与4-AP的结合力为氢键和疏水作用.结论 成功制备出1株稳定分泌的4-AP mAb的杂交瘤细胞株.通过同源建模对抗体可变区空间结构进行深入研究,为单链抗体及抗体改造提供参考,同时为4-AP含量检测提供新方法.
