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单表位抗体文献资料
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多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用
目的: 建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides, MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法.方法: 通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP, 将其作为免疫原免疫小鼠, 获得多克隆抗血清.将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immunomagnetic beads, IB), 通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体, 荧光偏振(fluorescence polarization, FP)法鉴定抗体的特异性, SDS-PAGE鉴定抗体纯度, 紫外分光光度法测定其回收率.结果: 合成的MAP具有较强的免疫原性, 免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶ 12 800.MAP制备免疫磁珠的佳包被浓度为100 mg/L, 包被效率高可达79%.应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体, 经鉴定与其他抗原表位无反应性, 其纯度为95%, 抗体的回收率为5.8%.结论: MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体, 其性质类似单克隆抗体.这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景.
