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用MAPs制备新肿瘤相关基因1A6/DRIM的多克隆抗体
目的:获得1A6/DRIM的N端特异性抗体并对其在细胞内的定位进行分析.方法:针对1A6/DRIM的N端多肽用多通道同步固相全自动合成系统合成,以无免疫原性的赖氨酸结构为核心偶联,将此多聚抗原肽(mutiple antigenic peptides,MAPs)免疫新西兰大白兔,从免疫兔血清中获得1A6/DRIM的多克隆抗体.结果:用Western Blot技术证明了1A6/DRIM的N端抗体,与C端特异性单克隆抗体识别相同的1A6/DRIM基因表达的310 000蛋白条带,经过Western Blot和免疫荧光的方法初步证实1A6/DRIM在多种胃癌细胞系、乳腺癌细胞系以及肝癌细胞系中表达,免疫荧光显示1 A6/DRIM主要定位在细胞核内.结论:对于用谷胱苷肽巯基转移酶(Glutathion-S-transferase,GST)融合蛋白方法不能诱导表达的蛋白,可利用合成MAPs制备抗原的方法获得抗体.本研究用此方法制备的抗体特异性识别1A6/DRIM蛋白产物并证明该基因主要在多种肿瘤细胞的核内表达.
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多聚抗原肽在临床检验和生物医学中的应用
多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAPs)是1988年由美国的Tam教授首先提出并应用的.它是一种呈放射分支状的聚合肽大分子物质,由一个分支状的肽核和以共价键连接的表面活性肽组成,与传统的连接在线形串联氨基酸骨架上的肽复合体不同.
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多聚抗原肽在临床检验和生物医学中的应用
多聚抗原肽(multiple antien petides MAPs)是1988年由美国的Tam教授首先提出并应用的.它是一种呈放射分支状的聚合肽大分子物质(见图A、B),由一个分支状的肽核和以共价健连接的表面活性肽组成.它与传统的连续在线形串连氨基酸骨架上的肽复合体不同(见图C、D).
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MAPs技术合成抗原肽在戊型肝炎诊断中抗原性初探
目的将多聚抗原肽(MAPs)技术用于免疫测定,为诊断戊型肝炎寻找更好的诊断试剂盒.方法根据戊型肝炎病毒(HEV)开放阅读框架2(ORF2)中含有的抗原表位,从戊型肝炎病毒中国株蛋白的氨基酸序列中选取S 30段抗原肽,用固相合成法分别进行化学合成普通线形抗原肽和MAPs肽段,并用ELISA分别检测其抗原性.结果与国外试剂盒相比较,两者的符合率有差异.但MAPs肽段的符合率高于普通线形抗原肽,在检测灵敏度、特异性上MAPs肽段明显优于普通线形抗原肽.结论以单一的戊型肝炎的抗原表位肽检测戊型肝炎存在漏检.在MAPs技术的基础上,合成多肽抗原的灵敏度得到明显提高.
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基于可重复利用免疫磁珠的抗体检测方法的建立
目的 基于可重复利用的免疫磁珠,建立一种简捷快速的特异性抗体检测方法 .方法 设计人类巨细胞病毒(human cytomegaloviruses,HCMV)PP150蛋白的抗原表位,并合成8分枝多聚抗原肽PP150-8MAPs.将PP150-8MAPs以共价结合形式包被于Dynabeads M-450 Tosylactivated磁珠表面,制备特异性免疫磁珠.用PP150-8MAPs免疫Balb/c小鼠制备抗此抗原表位的标准抗血清.应用免疫磁珠检测标准抗血清中的抗体,优化检测条件.在抗体检测反应结束后,洗脱抗体-二抗复合物,再生后的免疫磁珠重复用于标准抗血清样品的检测分析,并分析免疫磁珠可重复利用的次数.结果 制备免疫磁珠时,PP150-8MAPs的佳包被量为100μg/mL,包被效率为79%.用PP150-8MAPs免疫小鼠后,得到的抗血清滴度可达到1:12 800.用免疫磁珠法检测小鼠标准抗血清,免疫磁珠可重复进行20次以上的检测分析.结论 基于酶联免疫检测方法 ,包被抗原的免疫磁珠可重复应用于血清样品中特异性抗体的检测分析.此实验为建立一种新的可重复检测的高效清样品中特异性抗体的检测分析.此实验为建立一种新的可重复检测的高效免疫磁珠抗体分析方法 奠定了基础,在基础研究与临床检测中具有广泛的应用前景.
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多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用
目的: 建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides, MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法.方法: 通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP, 将其作为免疫原免疫小鼠, 获得多克隆抗血清.将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immunomagnetic beads, IB), 通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体, 荧光偏振(fluorescence polarization, FP)法鉴定抗体的特异性, SDS-PAGE鉴定抗体纯度, 紫外分光光度法测定其回收率.结果: 合成的MAP具有较强的免疫原性, 免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶ 12 800.MAP制备免疫磁珠的佳包被浓度为100 mg/L, 包被效率高可达79%.应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体, 经鉴定与其他抗原表位无反应性, 其纯度为95%, 抗体的回收率为5.8%.结论: MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体, 其性质类似单克隆抗体.这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景.
