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脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)文献资料
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人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定
目的:构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)Fab抗体的原核表达载体, 并制备高稳定性Fab抗体.方法:用PCR方法, 从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列, 分别构建表达质粒pET-28a(+)-VH和pET-28a(+)-VL, 并于工程菌BL21(DE3)star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化, 将抗体片段VH和VL共同复性, 通过二硫键形成Fab抗体, 再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力.结果:扩增出VL链和VH基因片段长约为650 bp和700 bp, 经BL21star表达出相对分子质量(Mr)约为28 000和30 000的目的蛋白, 共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力.结论:成功地制备抗NH-LBP Fab抗体, 为临床抗炎研究提供了条件.
