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ULBP4文献资料
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ULBP4原核表达、生物学功能鉴定及其单克隆抗体的制备和初步鉴定
目的:在大肠杆菌中表达ULBP4重组蛋白, 并制备其特异性的单克隆抗体(mAb), 为γδT细胞对ULBP4的识别机制研究奠定基础.方法:根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物, 用RT-PCR方法从HO-8910细胞中扩增得到ULBP4片段, 构建重组原核表达质粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌中获得表达且主要位于包含体中, 经纯化透析复性后, 分析其对NK细胞IFN-γ细胞因子分泌的影响.以ULBP4为抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合, 依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化培养、荧光免疫检测和流式细胞术以及Western blot筛选和鉴定抗ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株.结果:构建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表达体系, 并检测到重组蛋白的有效表达; 纯化的重组蛋白在体外培养体系中可以刺激NK细胞IFN-γ细胞因子的分泌.此外, 还获得了4株可稳定分泌抗人ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株.结论:成功地构建并表达了具有生物活性的ULBP4, 为γδT细胞的识别机制研究建立抗原制备平台, 同时所制备的抗人ULBP4 mAb, 为后续研究奠定了基础.
