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金属离子螯和层析文献资料
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可与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体的表达及其特性
目的: 在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv), 并对其特性进行鉴定.方法: 采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2, 从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv.对scFv DNA测序后, 以其阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在IPTG诱导下表达scFv并以金属离子螯和层析(IMAC)进行纯化, 用100 g/L SDS-PAGE、Western blot及ELISA分析纯化的scFv.将纯化的scFv与HepG2细胞共孵育后, 观察其对细胞生长的影响.结果: 经筛选获得的2个相对特异性的scFv,分别命名为SLH04及SLH10.经IPTG诱导获得可溶性scFv的表达.Western blot分析证明, 表达产物的相对分子质量(Mr)均为36 000左右, 与理论预期值相符.ELISA检测表明,纯化的scFv能与HepG2细胞特异性结合, 并抑制HepG2细胞的生长.结论: 从人源噬菌体抗体库中, 筛选出能与HepG2细胞特异性结合的scFv, 并在大肠杆菌中表达, 有望用于肝癌生物治疗的实验研究.
