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血小板 GPIbα文献资料
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GST-GP302融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清的制备
目的: 在大肠杆菌中表达血小板糖蛋白GPIbα之vWF结合区(GP302)与谷胱甘肽S-转移酶GST的融合蛋白并制备其抗血清 . 方法: 将GP302片断插入GST融合表达载体pGEX-4T-1, 重组载体酶切鉴定后, 在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-GP302融合蛋白, SDS-PAGE分析表达产物.包涵体经变性复性后免疫新西兰白兔, 制备抗血清, ELISA、Western blot检测重组抗原的免疫活性.结果: 重组质粒酶切鉴定表明, GP302基因已正确插入到pGEX-4T-1中, 经IPTG诱导后, 表达出相对分子质量(Mr)约为 59 000的融合蛋白, 获得了ELISA效价为1×10-5的多克隆抗体.Western blot证明所制备的多抗可以与血小板糖蛋白特异性结合.结论: GP302片断在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体, 为检测血小板糖蛋白GPIbα及其在其他体系中的表达提供了一种检测途径.
