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二种方法测定血清中乙型肝炎表面抗原的比较
目的:将免疫-PCR方法应用于血清乙肝表面抗原(HBsAg)测定中.方法:采用链酶亲和素作为连接分子建立血清HBsAg免疫-PCR检测方法,并与ELISA法比较.结果:免疫-PCR测定血清中HBsAg敏感性是ELISA法的800倍,70例乙肝病毒携带者血清免疫-PCR检测HBsAg阳性率为24.2%,ELISA法检测全部阴性,二种方法相比较有显著差异(p＜0.05).结论:免疫-PCR方法应用于血清HBsAg的测定具有重要临床价值.
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双抗体夹心免疫-PCR检测弓形虫循环抗原的实验研究
目的探索弓形虫病的病原学检测方法.方法用游离的亲合素将生物素化的二抗和生物素化的腺病毒六邻体基因重组质粒DNA偶联起来,通过PCR扩增标记的DNA检测弓形虫循环抗原,建立了免疫-PCR检测方法;用该方法和ELISA法平行检测感染鼠的血清,对比研究两者敏感性及循环抗原的检出时间.结果免疫-PCR法检测弓形虫循环抗原阳性血清的大稀释度为1:2 560,ELISA法为1:10;免疫-PCR法在感染后第2天检测到循环抗原,ELISA法在第4天检测到循环抗原.结论免疫-PCR是一种特异性高、敏感性强的弓形虫循环抗原的检测方法,可作为弓形虫病病原学的诊断方法.
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免疫-PCR早期诊断肾综合征出血热的研究
目的建立一种敏感、特异的肾综合征出血热(HFRS)早期诊断方法.方法应用免疫-PCR方法检测不同病程、临床诊断为HFRS的患者血中抗HFRS-IgM抗体,同时与ELISA和IFAT二种方法进行比较.结果免疫-PCR检测96份HFRS患者血清中抗HFRS-IgM抗体的阳性率为76%,对51份发热期患者的阳性检出率为62.7%,而ELISA法和IFAT法对同批患者的阳性检出率分别为57.3%和39.2%,及49%和31.4%.20份甲型肝炎阳性血清、30份正常人血清及20份HFRS-IgM阴性并掺入类风湿因子阳性的血清,免疫-PCR检测均为阴性.结论免疫-PCR检测抗HFRS-IgM抗体敏感性高,特异性强,可作为HFRS早期诊断方法.
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免疫-PCR法检测儿童尿中生长激素水平
目的:建立超灵敏度的免疫-PCR法检测尿中生长激素的水平.方法:在经戊二醛处理的PCR管中完成双抗夹心酶免疫反应,通过PCR扩增连接在抗原-抗体复合物上的DNA分子,琼脂糖电泳及扫描判断结果.结果:处理后的PCR管完全能够进行免疫反应,其灵敏度可达0.1 pg/ml左右.琼脂糖电泳及扫描结果表明,30例正常青春发育期前儿童与10例经常规生长激素激发试验诊断为生长激素缺乏(growth hormone-deficient,GHD)的儿童,12 h夜尿生长激素(GH)水平有明显差异.结论:此法的敏感度比酶标法高103～104倍,适于儿童尿中微量GH水平的检测.
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应用免疫-PCR检测弓形虫循环抗原的实验研究
目的控索弓形虫感染早期诊断方法。方法用链亲素将生物素化的二抗和生物素化的DNA偶联起来，通过PCR扩增标记DNA检测固定的抗原，建立了弓形虫循环抗原免疫-PCR检测技术，用该技术和ELISA法平行检测系列稀释的弓形虫的感染鼠阳性血清中的CAg以及实验感染鼠血清中CAg的动态变化，对比研究二.者之间的敏感性。结果免疫-PCR法检测弓形虫CAg吴阳性的血清高稀释度为1：1000，ELISA法检测弓形虫CAg呈阳性的血清高稀释度为1 :5，免疫一PCR早在鼠感染弓形虫后第3天测到CAg，ELISA早在鼠感染弓形虫后第5天测到CAg。结论免疫-pCR是一种特异性强、敏感性高的弓形虫CAg检测方法，敏感性较ELISA法提高了200倍，免疫-PCR检出阳性结果时间早，为弓形虫病早期诊断提供了科学依据。
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三种肾综合征出血热诊断方法的比较
目的探索一种更为敏感而特异的肾综合征出血热特异性抗体的检测方法.方法采用免疫-PCR、ELISA和IFAT三种方法检测130份HFRS患者血清中抗HFRS-IgG抗体.结果免疫-PCR方法的灵敏度为78.5%,特异性为100%;ELISA法和IFAT法的灵敏度分别为47.7%和49.2%.结论免疫-PCR方法的敏感性高于ELISA法和IFAT法,是适用于肾综合征出血热特异性抗体检测的好方法.
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免疫-PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体方法的建立
目的建立高灵敏性和高特异性的免疫-PCR方法检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清中抗核衣壳蛋白抗体.方法用汉坦病毒(76-118株)重组核衣壳蛋白为抗原包被聚苯乙烯微滴度板,与经ELISA法和临床均已确诊为HFRS患者的血清进行抗原抗体特异性反应,以链霉亲和素为桥梁将生物素标记的抗体与生物素标记的DNA指示分子相连,PCR扩增DNA指示分子,通过检测指示分子DNA来反映肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的水平,并与传统的ELISA法进行比较.结果免疫-PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的敏感性是ELISA法的25000 倍;30例HFRS阳性患者血清免疫-PCR检测均为阳性,20例甲型肝炎阳性血清和20例正常人血清免疫-PCR检测均为阴性.结论免疫-PCR方法敏感性高,特异性强,有可能作为一种高敏感性的检测方法用于HFRS的临床辅助诊断.
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血清MG7-IPCR诊断卵巢癌的价值研究
目的:从分子水平探讨胃癌相关抗原MG7-Ag对卵巢恶性肿瘤早期诊断的临床意义.方法:应用免疫-PCR(polymerase chain reaction)技术检测74例卵巢肿瘤患者血清MG7-Ag水平,并分析其与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系.结果:①血清MG7-Ag免疫-PCR技术诊断卵巢恶性肿瘤的敏感性为69.1%,特异性为89.5%,准确性74.3%,阳性预测值为95%,阴性预测值为50%.②粘液性肿瘤的MG7-Ag阳性表达率为63.6%,显著高于浆液性肿瘤(31.3%).③该方法对早期粘液性癌有很高的诊断敏感性.④血清MG7-Ag阳性表达率在卵巢恶性肿瘤临床分期、病理分级、肿瘤大小及患者年龄之间无显著差异.结论:血清MG7-Ag免疫-PCR技术对卵巢恶性肿瘤具有普遍诊断意义,可作为临床早期诊断卵巢癌的检测手段,尤其适用于对粘液性上皮癌的早期诊断.
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胃癌相关抗原MG7-Ag免疫PCR检测系统有关影响因素的分析
目的应用免疫PCR技术检测胃癌相关抗原MG7-Ag时，对影响该系统的相关因素进行分析比较。方法以ELISA法与免疫PCR同时检测胃癌抗原MGAg，以比较这两种方法检出抗原的敏感性和特异性。同时检测抗体浓度、反应时间、链亲和素的浓度，以及DNA拷贝数对免疫PCR系统的影响。结果免疫PCR法检出抗原的敏感性远远高于ELISA法，显著提高了胃癌患者外周血中MGAg抗原的检出率。与ELISA法相比较，相应的抗体浓度、反应时间、链亲和素的浓度不会导致非特异性条带的出现。同时确定DNA的适拷贝数为10-3ng，即对系统非特异性的影响小。结论免疫PCR方法检测抗原的敏感性优于常规ELISA法，特异性较好，可成为检测患者外周血中肿瘤抗原的有效手段。
