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HER 2蛋白文献资料
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HER-2蛋白疫苗的制备及在小鼠中诱导的抗体应答
目的:制备HER-2抗原疫苗.方法:采用RT-PCR方法从HER-2+SKBR3细胞株中获得HER-2基因胞外段编码区cDNA,构建pQE-30-HER-2原核表达载体,在大肠杆菌中表达HER-2胞外区蛋白.Ni-NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,Western Blot鉴定.用获得的蛋白免疫小鼠,检测重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答.结果:构建的pQE-30-HER-2质粒经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因的序列与设计的序列完全相同.构建的质粒转化DH5α后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,该重组蛋白以包涵体形式表达,且与mAb Herceptin有较好的结合活性.包涵体用Ni-NTA柱亲和层析纯化后,梯度尿素复性,大限度的获得了可溶性的HER-2胞外区蛋白.用重组蛋白免疫小鼠,得到了较高的抗体滴度.结论:成功制备了HER-2蛋白疫苗并诱导出较高抗体滴度,为下一步工作打下基础.