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同向串联文献资料
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抗菌肽Aurein1.2基因的同向串联及其克隆载体的构建和鉴定
目的: 构建抗菌肽Aurein1.2基因多拷贝串联体,并将目的基因串联产物克隆到载体pUC18上.方法: 分别合成含相同黏性末端的Aurein1.2单拷贝基因、EcoRⅠ前接头及SalⅠ后接头.单拷贝基因分别与前、后接头连接,通过控制基因和接头加入的量及时间,可得到两侧有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的同向串联的多拷贝基因,选取合适拷贝数的基因,将其克隆到载体pUC18上.结果: PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功.结论: 该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步克隆到表达载体并进行高效表达打下基础.
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丽蝇抗病毒肽Alloferonl基因串联体的构建和表达
目的:克隆和表达Alloferonl基因2串联体.方法:利用同尾酶法基因同向串联方案,在人工合成Allofemnl全基因的基础上,将Alloferonl基因由单体连接成2串联体,继而将获得的正确Alloferonl基因2串联体插入pGEX-4T-1表达载体诱导表达.结果:构建的Alloferonl基因2串联体经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同.Alloferonl基因2串联体插入pGEX-4T-1载体后,重组菌经37℃诱导4 h,SDS-PAGE分析结果显示,该串联体得到较高水平的表达.结论:Alloferonl基因2串联体的构建与表达均获得了成功.
