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信号识别微粒受体文献资料
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一个新的人信号识别微粒受体基因APMCF1的克隆、表达和抗体制备
目的: 克隆人类新基因APMCF1,原核表达并制备其特异性多克隆抗体 . 方法: 运用5′末端快速扩增方法,结合Genbank数据库进行电子拼接, 完善APMCF1的5′端序列;利用RT-PCR方法,扩增出APMCF1的蛋白编码cDNA序列,克隆入pGEX-KG中,构建APMCF1的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达后获得了GST-APMCF1融合蛋白,以此融合蛋白为免疫原制备兔抗血清,用Western blot 鉴定抗体特异性. 结果: 通过RACE及电子拼接,完善了APMCF1的5′端序列,其cDNA长度为1745 bp,与鼠信号识别微粒受体β亚基序列同源性较高,染色体定位于3q22.2;克隆了APMCF1 816 bp的开放读框序列并表达了GST-APMCF1融合蛋白. 制备了特异性兔抗GST-APMCF1多克隆抗体. 结论: APMCF1可能是编码人类信号识别微粒受体β亚基的基因. 该分子多克隆抗体的初步制备,为进一步研究APMCF1的功能提供了必要工具.
