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分子亚克隆文献资料
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人神经生长因子成熟蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达和生物活性鉴定
目的在大肠杆菌中表达人神经生长因子成熟蛋白基因片段(hNGFβ)并检测其生物活性.方法将NGFβ目的基因亚克隆人表达载体pBV220的BamHI-BamHI位点,连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株通过热诱导表达NGFβ蛋白,利用溶解包涵体和重折叠使表达产物复性,将复性后的蛋白质加入体外培养的鸡胚背根神经节及PC12细胞BrdU掺入实验,观察表达蛋白的生物学活性.结果成功构建了重组质粒pBV220/NGFβ.使用该质粒转化DH5o宿主菌,使用热诱导方法表达了NGFβ蛋白,SDS-PAGE结果提示表达蛋白主要存在于包涵体中.通过肝素亲和层析可以获得纯度大于90%的NGFβ.每升表达菌可以获得1.8～2.0 mg NGFβ.鸡胚背根神经节突起生长实验和PC12细胞培养生长刺激BrdU掺入实验表明原核表达的NGFβ是具有生物活性的.它的生物活性按生物制品鉴定章程判断为1×105BU/g.结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的NGFβ蛋白.
