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戊型肝炎病毒开读框架3的分子生物学特性及研究进展
结合近年来在HEV病毒ORF3基因片断方面的研究成果,详细论述了ORF3的分子生物学特性,编码蛋白的生物学功能和它在戊型肝炎的诊断与预防中发挥的作用.对来自不同实验室的科研数据进行了综合分析及科学推论,预测并展望了今后HEV的研究方向.
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戊型肝炎病毒基因 ORF3编码蛋白在大肠杆菌中的表达及鉴定
实验以两种不同的表达策略构建了两个以大肠杆菌DE3为宿主的原核表达载体,由T7启动子启动外源基因的转录,在诱导剂IPTG诱导下成功地进行了戊肝病毒ORF3蛋白的原核表达.并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹、竞争抑制法酶联免疫等一系列实验对两种表达产物进行了鉴定和分析.综合分析两种表达结果发现,在融合型表达中ORF3蛋白与其融合标签蛋白(谷胱甘肽S-转移酶)之间存在免疫交叉反应,而且这种融合标签蛋白在空间结构上可能对ORF3蛋白中的抗体结合位点有掩盖作用.
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戊型肝炎病毒基因片段开读框架3(369bp)的克隆载体及真核表达载体的构建
通过聚合酶链式反应(PCR)技术,以戊肝病毒cDNA为模板将开读框架3的基因片段扩增并克隆入载体pUC18中.再对扩增片段进行酶切鉴定及测序,结果表明此片段与膜板序列的同源性达到99%以上.将此片段克隆后通过一系列分子生物学技术装入真核胞内表达载体PPIC3及分泌性载体PPIC9中,并对载体进行酶切鉴定证实外源基因插入的正确性.终完成表达载体的构建.