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丝氨酸:蛋白激酶C文献资料
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丝氨酸331是蛋白激酶C诱导血栓素α受体磷酰化和脱敏的主要部位
目的:检测人类血栓素α受体(TPα)C端丝氨酸/苏氨酸残基的各种丙氨酸诱变体作为PKC底物的能力,以确定被PKC磷酰化和脱敏的特异的丝氨酸/苏氨酸残基.方法:为了易于鉴定被磷酰化的细胞内区段,使用甘胱甘肽S-转移酶(GST)-细胞内区段融合蛋白作纯化的PKC底物,然后突变磷酰化蛋白的cDNA,以找出TPα被PKC磷酰化的主要部位,并将有组氨酸尾野生型或诱变型血栓素受体α稳定地转移到人类胚胎肾(HEK)293细胞,以研究该受体的磷酰化和脱敏.结果:仅C-端能充当纯化PKC底物.丝氨酸-331(mP4)被显示强的磷酰化,丝氨酸-324(mPl)则轻微磷酰化,丝氨酸-329(mP3)则微弱磷酰化,而其它丝氨酸/苏氨酸残基没被发现磷酰化.佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸盐(PMA)诱导表达野生型TPα的HEK 293细胞磷酰化.然而不能显示触发表达丝氨酸331丙氨酸诱变受体的HEK 293受体磷酰化.用PMA预处理表达野生型受体的HEK 293细胞能抑制I-BOP诱导Ca2+释放.然而用PMA预处理表达诱变受体的细胞不能中止I-BOP抑制Ca2+释放.结论:丝氨酸331是TPα磷酰化和脱敏的主要和关键部位.
