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前列腺毛细血管内皮细胞屏障功能研究
目的:通过利用体外培植大鼠前列腺毛细血管内皮细胞的方式,研究分析其屏障功能.方法:于体外对所选取的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞进行培养,对连接前列腺毛细血管内皮细胞间的紧密连接蛋白claudin-1使用免疫组化观察,对其前列腺毛细血管内皮细胞的组成结构使用电镜和光镜观察.在跨膜测量仪下检测前列腺毛细血管内皮细胞的跨膜电阻,另外通过酚红渗漏试验对前列腺毛细血管内皮细胞的通透性进行检查.结果:在体外培养的情况下,细胞能够转变为紧密情形的单层细胞结构,在相隔的前列腺毛细血管内皮细胞之间存在紧密连接蛋白的表达,紧邻的单层腺内皮细胞有了紧密连接的现象.当在第8天的时候,针对其在体外培育细胞的检测下,跨膜电阻能够提升到213.22Ω/cm2(s =4.1),在酚红渗漏试验中,结果显示,细胞跨膜电阻越大,在基底侧检测到的酚红浓度水平则越低.结论:研究结果显示大鼠的前列腺毛细血管内皮细胞具备屏障特性,能够作为研究细胞屏障功能的模型.
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乌司他丁对肠道上皮细胞屏障损伤的保护作用分析
目的 探讨乌司他丁(UTI)对肠道上皮细胞屏障损伤的保护作用及其机制.方法 培养Caco-2细胞,并建立肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的单层上皮细胞模型,随机分为空白对照组、TNF-α模型组、UTI低剂量组(5万U/kg)、UTI中剂量组(10万U/kg)、UTI高剂量组(20万U/kg).采用Millicell电阻仪和多功能读板仪分别测定各组上皮细胞电阻(TER)和异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran),酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定白细胞介素6(IL-6)、IL-10水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫蛋白质印记(Western blot)技术测定紧密连接蛋白闭合蛋白(occludin)和紧密黏连蛋白1(ZO-1)表达水平.结果 与空白对照组相比,TNF-α模型组TER、FITC-dextran、occludin和ZO-1表达水平均明显下降,IL-6、IL-10、细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);与TNF-α模型组比较,经UTI处理后,TER、FITC-dextran、occludin和ZO-1表达水平升高,IL-6、IL-10、细胞凋亡率降低(P＜0.05),其中以UTI高剂量组变化显著(P＜0.05).结论 UTI可能通过抑制炎性介质释放,调节紧密连接相关蛋白表达,抑制TNF-α诱导的肠道上皮细胞屏障功能损伤.
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纳米载体逃逸溶酶体机制及其调控的研究进展
纳米载体传递药物或核酸进入细胞,要穿透细胞膜,逃逸溶酶体并进入细胞核,其中逃逸溶酶体是纳米载体发挥作用的关键步骤.近年来,国内外许多学者根据纳米载体逃逸溶酶体的机制,利用大分子对现有纳米载体进行修饰或合成新型纳米载体.本文作者就纳米载体进入细胞的屏障、逃逸溶酶体机制及根据逃逸机制对其进行修饰调控3个方面做进行分析和综述.
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体外血脑屏障的建立
目的：利用大鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞于体外建立血脑屏障。方法分别取10只出生7～10 d、2只出生1～3 d的SD大鼠，断头处死后取脑组织，分别分离培养脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞，采用免疫细胞染色方法鉴定脑微血管内皮细胞，以脑微血管內皮细胞因子Ⅷ作为标记抗原，以神经胶质原纤维酸性蛋白（ GFAP）作为标记抗原鉴定星型胶质细胞。以非接触方式共培养脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞的方法建立体外血脑屏障。接种12 d将电极插入待测Transwell小室（培养模型）、细胞培养液、空白Transwell小室（细胞培养液为媒介）。测定跨膜电阻、测算荧光素钠渗透系数（ Pe），衡量模型完整性。结果接种12 d时，模型、细胞培养液、空白Transwell小室的电阻值分别为180、64、112Ω／cm2。接种12 d时模型Pe为（4．67±0．4）×10－6 cm／s。结论成功建立体外血脑屏障，屏障效应较好、完整性较高。
