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甲型流行性感冒病毒文献资料
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反向遗传操作重拯甲型流行性感冒病毒A/PR/8/34(H1N1)
目的建立并完善流感病毒的反向遗传操作系统.方法将截断的人源RNA多聚酶Ⅰ的启动子与鼠源RNA多聚酶Ⅰ终止子序列嵌套在RNA多聚酶Ⅱ的启动子与终止序列之间,构建成质粒载体系统.将甲型流行性感冒病毒A/PR/8/34(H1N1)全基因组8个基因节段的互补DNA(cDNA)克隆入该系统,共转染共培养的293T(人胚肾细胞)和MDCK(狗肾传代细胞)细胞.利用细胞的酶系统重拯出具有感染活性的流感病毒颗粒.在MDCK细胞上滴定病毒滴度.结果构建了流感病毒的Pol Ⅰ-PolⅡ质粒系统.8个质粒介导的DNA转染系统在转染后30h上清经滴定病毒产量为8×10 3pfu/ml.结论完善了流感病毒的反向遗传操作系统.应用该系统在体外完全利用病毒的cDNA在无辅助病毒的情况下cDNA成功包装出具有感染活性的流感病毒.
