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中国云南省与缅甸接壤地区健康儿童肠道病毒携带情况调查
目的 了解缅甸入境健康儿童和云南省口岸地区健康儿童肠道病毒(EV)携带情况及病毒型别特征.方法 在10个边境口岸＜15岁的健康儿童中采集粪便标本,进行病毒分离和型别鉴定.共采集到319份粪便标本.脊髓灰质炎(脊灰)病毒(PV)用抗体中和试验鉴定,并送国家脊灰实验室进行型内鉴别;非脊灰肠道病毒(NPEV)用基因测序方法进行鉴定;腺病毒用血清学方法鉴定.结果 共检测到EV 53株(带病毒率为16.6%),其中PV23株(阳性率7.2%)经国家脊灰实验室证实均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;NPEV 30株(阳性率9.4%),经VP1区核苷酸序列测定,除1株未被所有EV通用引物扩增外,其余29株分别属于HEV-A组(1株,1个血清型,占3.3%)、HEV-B组(20株,11个血清型,占66.7%),HEV-C组(8株,4个血清型,占26.7%),未检测HEV-D组病毒.同时还检测到腺病毒4株,阳性率为1.25%.分别做B组和C组病毒基因树,相同型别的分离株都与对应的标准株聚集在一起.同源性计算表明,分离株与对应标准株的核苷酸同源性及氨基酸同源性分别在75%和85%以上,符合国际测序定型标准.结论 在中国云南省与缅甸接壤地区,EV携带率较高,特别是PV阳性率高于急性弛缓性麻痹常规监测.EV中以HEV-B组病毒为主,病毒血清型的分布具有多样性,并发现EV73(2株)、EV75(1株)、EV80(1株)和Ev96(4株)等新型EV.
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云南省1例疫苗衍生株脊髓灰质炎病毒病例的调查分析
本调查旨在了解2010年云南省昭通市1株脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗衍生毒株(Vaccine-derived poliovirus,VDPV)引起的病例的流行病学特征、该病例的排毒情况及其周围健康儿童的肠道病毒(EV)携带情况和病毒型别特征.在该病例的发生地进行现场流行病学调查,连续采集病例粪便标本,采集密切接触者及病例居住地健康儿童粪便标本进行病毒分离和型别鉴定.经省级专家组终分类诊断为VDPV病例;实验室结果显示病例标本中未再检出VDPV密切接触者及周围健康儿童标本中均未检测到脊灰疫苗株病毒及VDPV,AFP病例人户主动搜索未发现类似病例,表明该病毒未在当地造成循环;在健康儿童中检测到NPEV 21株,病毒携带率为20.0%;经VPl区核苷酸序列测定,21株NPEV分别属于HEV-A组(11株,3个血清型,占52.4%)和HEV-B组(10株,4个血清型,47.6%).
关键词： 疫苗衍生株脊髓灰质炎病毒 流行病学调查 肠道病毒 测序定型 健康儿童 -
2012年云南省及缅甸籍入境健康儿童肠道病毒的分子生物学检测
目的 了解2012年云南省和缅甸籍入境健康儿童肠道病毒(Enterovirus,EV)带毒情况及病毒型别.方法 采集6个边境设区的市(州、地区,下同)10个县和7个非边境市10个县＜15岁健康儿童粪便标本600份(单份粪便标本,其中缅甸籍入境儿童100份),进行病毒分离和基因测序定型.结果 600份粪便标本共检测到EV53株,带毒率为8.83％.其中脊髓灰质炎病毒5株,阳性率0.83％,均为疫苗株,未发现脊灰野病毒.检测到非脊灰肠道病毒(Non-polio EV,NPEV) 48株,阳性率8.00％,其中人类肠道病毒(Human EV,HEV)A组5株(3个血清型,占10.42％),HEV B组(Group B) (HEV-B)42株(14个血清型,占87.50％),HEV C组6株(4个血清型,占11.32％),未分离到HEV D组.结论 2012年600份健康儿童粪便标本中,从中国籍儿童分离到EV48株,分离率8.00％,缅甸籍儿童中分离到EV5株,分离率0.83％,中国籍儿童EV携带率较高,并以HEV-B组为主.
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2014-2015年云南省健康儿童肠道病毒带毒状况调查
目的：了解2014—2015年云南省健康儿童中肠道病毒( enterovirus, EV)带毒情况和病毒型别,并对埃可病毒6型(echovirus type 6, ECHO6)、ECHO25和ECHO11的基因特征进行分析。方法采集3个内地州(市)6~7个县及5个边境州8~9个县<15岁健康儿童粪便标本共921份进行病毒分离和基因测序定型,其中2014年共采集453份(均为单份便,其中内地儿童213份,边境儿童240份),2015年共采集468份(内地儿童195份,边境儿童273份)。结果2014年,从内地儿童粪便标本中分离到EV 20株,分离率为9.39%(20/213),从边境儿童中分离到EV 16株,分离率为6.67%(16/240)。2014年病毒总体分离率为7.95%(36/453)。从病毒型别来看,B种病毒分离率高(88.89%,32/36),其次为A种病毒(11.11%,4/36),未分离到C种(包括脊髓灰质炎病毒)和D种病毒。2015年,从内地儿童粪便标本中分离到EV 13株,分离率为6.67%(13/195),从边境儿童中分离到EV 33株,分离率为12.09%(33/273)。2015年病毒总体分离率为9.83%(46/468)。从病毒型别来看,B 种病毒分离率高(78.26%,36/46),其次为 C 种病毒(19.57%,9/46)和 A 种病毒(2.17%,1/46),未分离到 D 种病毒。两年共从921份粪便标本中检测到 EV 82株(分离率为8.90%,82/921),其中,从内地儿童分离到33株,分离率为8.09%(33/408),从边境儿童中分离到EV 49株,分离率为9.55%(49/513)。82株EV中,脊髓灰质炎病毒(poliovirus, PV)9株(阳性率为0.98%,9/921),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒；检测到非脊灰肠道病毒(non-poliovirus, NPEV)73株(阳性率为7.93%,73/921)。结论2014年,内地儿童病毒分离率(9.39%)高于边境儿童(6.67%),而2015年边境儿童分离率(12.09%)高于内地儿童(6.67%),两年的病毒型别均以B种病毒为主。未分离到脊灰野病毒和肠道病毒D种,云南省维持无脊灰状态良好。
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2013年云南省内地及边境地区健康儿童肠道病毒带毒调查研究
目的：了解2013年云南省内地及边境地区健康儿童肠道病毒（enterovirus， EV）带毒情况及病毒型别，并对埃可病毒19型（echovirus 19， E19）和柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3， CB3）的基因特征进行分析。方法采集6个内地州（市）10个县（市）及6个边境州（市）10个县（市）＜15岁健康儿童粪便标本606份（均为单份便样，其中内地儿童300份，边境儿童306份），进行病毒分离和基因测序定型。结果606份粪便标本中共检测到EV 38株（带毒率为6．27％），其中，从内地儿童分离到14株，分离率4．66％（14/300），从边境儿童中分离到肠道病毒24株，分离率7．84％（24/306）。38株EV中，脊髓灰质炎病毒（poliovirus， PV）7株（阳性率1．16％，其中1株为PV1＋2混合型），均为疫苗株，未发现脊灰野病毒；检测到非脊灰肠道病毒（non-poliovirus， NPEV）31株（阳性率5．12％），均为人类肠道病毒B组（human enterovirus B， HEV-B）病毒，未分离到人类肠道病毒A组（ HEV-A）和D组（ HEV-D）病毒。结论2013年云南省健康儿童中，边境地区儿童肠道病毒携带率高于内地儿童，并以HEV-B组病毒为主。未分离到脊灰野病毒，云南省维持无脊灰状态良好。对云南省E19和CB3病毒的基因进化特征分析表明这两种病毒具有基因多样性特点。
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云南省健康儿童中1株肠道病毒新毒株EV-C99的分离及其基因特征分析
目的 对云南省2016年健康儿童中1株肠道病毒(enterovirus,EV)新毒株EV-C99进行分离并对其基因特征进行分析.方法 按世界卫生组织( World Health Organization,WHO)推荐的方法对该名儿童的大便标本进行病毒分离,提取该病毒RNA并对其VP1区基因进行RT-PCR和基因测序,用Sequencher 5. 0软件对序列进行编辑和拼接.所得序列在GenBank进行" BLAST"搜索,得到初步结果,再用MEGA5. 2软件计算与原型株的核苷酸和氨基酸同源性,按目前肠道病毒测序定型标准确定病毒终型别并进行基因特征分析.结果 该病毒能被494/496和495/497引物扩增,经Sequencher 5. 0软件拼接和编辑后得到约1 200 bp的序列,该序列在GenBank进行" BLAST"搜索,初步结果为新型肠道病毒EV-C99.与EV-C99病毒的原型株BAN00-10461(基因库编号:EF015008)对比分析后得到该病毒VP1区完整序列为909 bp,与原型株的核苷酸( nucleotide,nt)同源性( identity)为77.05%,氨基酸(amino acid,aa)同源性为90.04%,按肠道病毒测序定型标准,确定该病毒为EV-C99,是人类肠道病毒C组中的一种新型病毒.结论 2016年云南省健康儿童肠道病毒带毒调查中分离到一株肠道病毒新毒株EV-C99,是国内第3次报道该病毒.基因进化分析表明,云南分离株与新疆分离株、山东分离株都为B基因型,但3个省的分离株位于不同的进化分支,该病毒具有基因多样性特点.
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2010年云南边境地区健康儿童肠道病毒带毒调查
目的 对2010年云南省与缅甸接壤地区15岁以下健康儿童肠道病毒带毒情况进行调查.方法 采集边境地区15岁以下健康儿童的粪便标本(每个儿童1份),对共400份标本进行病毒分离和基因测序定型.结果 400份便标本中检测到非脊灰病毒( non - polio virus,NPV)21株,NPV分离率5.3％.21株病毒全为HEV - B组病毒,未分离到HEV - A、HEV - C、HEV - D组病毒和脊灰病毒.结论 2010年云南省边境地区健康儿童中肠道病毒以B组病毒为主.
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2002年云南非脊灰病毒测序定型和ECHO13病毒基因特征分析
目的 对云南省2002年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non - polio,NPV)的带毒情况及埃柯病毒13型(echovirus 13,E13)的基因特征进行描述.方法 按Obster等介绍的方法,对2002年云南省脊灰实验室分离到的21株NPV进行基因测序定型.结果 2002年云南省共报告267例AFP病例,共采集到＜15岁AFP病例的合格粪便标本257份,257份便标本中共检测到NPV43株(带毒率为16.7％),其中脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)22株(阳性率8.6％),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒；检测到非脊灰病毒(NPV)21株(阳性率8.2％).21株EV中,12株为人类肠道病毒B组(HEV -B,11个血清型,其中3株为E13),3株为人类肠道病毒C组(HEV -C,1个血清型),未分离到HEV-A和HEV -D组病毒.结论 2002年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率不高.对3株常见的E13进行基因进化分析,表明E13病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型).
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云南省1997-2010年新型肠道病毒监测研究
目的 对云南省1997-2010年分离的新型肠道病毒进行基因测序定型并对EV75、EV96的基因特征进行分析.方法 按文献报道的方法对云南省1997-2010年急性迟缓性麻痹病例(AFP)及20072010年健康人群中分离的“不能定型的肠道病毒(untypable enteroviruses)”进行RT-PCR和VP1区测序定型.结果 共检测到7种新型肠道病毒,计25株.其中,A组病毒1个血清型(EV76,2株),B组病毒5个血清型(EV73,3株；EV75,3株；EV80,2株；EV81,1株；EV83,3株),C组病毒1个血清型(EV96,11株).7种新型肠道病毒中,EV96分离年份广:在AFP病例中于1998年、1999年、2000年和2004年分离到,在健康人群中于2010年分离到.结论 新型肠道病毒在云南省分布广泛,尤其以EV96型分离数多,分离年份广.EV75、EV96具有基因多样性特点,但新型肠道病毒与疾病的关系值得进一步研究.
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2016年云南省边境地区健康儿童肠道病毒带毒调查研究
目的 了解2016年云南省边境地区健康儿童肠道病毒(enterovirus,EV)带毒情况及病毒型别,为今后预防和控制EV提供实验室基础.方法 于2016年采集云南省10个边境县(市)＜15岁健康儿童粪便标本500份(均为单份便),进行病毒分离和基因测序定型.结果 500份便标本中共检测到EV 41株(带毒率为8.20％,41/500).41株EV中,EV-A病毒3株(阳性率0.60％,3/500);EV-B病毒35株(阳性率7.00％,35/500),其中新型病毒EV-B73 1株(阳性率0.20％),EV-B80 1株(阳性率0.20％);EV-C病毒3株(阳性率0.60％),EV-C病毒中脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒(poliovirus,PV)1株(阳性率0.20％),为疫苗株,未发现脊灰野病毒,EV-C99病毒1株(阳性率0.20％).结论 2016年云南省边境地区健康儿童粪便标本EV病毒检测结果以EV-B组病毒为主,并分离到新型病毒EV-B73、EV-B80和EV-C99各1株.云南省维持无脊髓灰质炎状态良好.对E-30和E-3病毒的基因进化特征分析表明这两种病毒具有基因多样性特点.
