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华东农村地区利福平耐药结核病的分子流行病学特征研究
目的 描述华东农村地区利福平耐药结核分枝杆菌(结核菌)的耐药相关分子特征和成簇性规律.方法 以浙江省和江苏省两个农业县结核病防治所一年内所有登记的结核菌检测阳性肺结核病例为研究对象,收集痰标本、培养分离菌株,并进行问卷调查;对培养获得的结核菌株采用比例法进行药敏试验.对获得的65株利福平耐药结核菌株进行rpoB基因利福平耐药决定区和katG基因异烟肼耐药相关热点区测序,采用间隔区寡核苷酸分型(spoligotyping)方法识别北京株,采用IS6110限制性内切酶多态指纹技术(RFLP)对分离株进行基因分型和成簇性分析.结果 92%(60/65)的利福平耐药菌株在利福平耐药决定区531位(57%)、526位(29%)或516位(11%)发生突变,82%(49/60)的rpoB基因突变菌株为耐多药结核菌(MDR-TB);spoligotyping识别H{54株(83%)北京家族菌株;IS6110-RFLP发现共有24株(37%)利福平耐药菌株成簇,形成11个簇,提示簇中病例的结核菌近期传播.所有成簇菌株都为MDR-TB.共有7个簇,簇内菌株具有不完全相同的利福平耐药相关的rpoB基因突变.分析可能与成簇性相关的因素,初治病例在菌株成簇患者中的比例高于在菌株非成簇患者中所占的比例(初治/复治:OR=3.342,95%CI:1.081～10.32).结论 在其他耐药结核菌(如异烟肼耐药结核菌)中进一步产生对利福平的选择性耐药和生长,很有可能是利福平耐药结核病流行的基础,而既往较长的不规则治疗史也为利福平耐药的发生和传播提供条件.
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结核分枝杆菌rpoB基因突变特征与利福平耐药水平关系的研究
目的 了解结核分枝杆菌rpoB基因突变特征与利福平耐药水平的关系.方法 测定266株(109株利福平耐药株,157株利福平敏感株)结核分枝杆菌利福平MIC值及其rpoB基因序列,分析不同突变特征的菌株其利福平MIC值的差异.结果 109株利福平耐药株rpoB基因皆发生错义突变,常见突变密码子531与526的突变频率分别为69.7％与17.4％.利福平耐药株中单密码子突变株占82.6％,多重密码子突变株占17.4％.531单密码子突变株与526单密码子突变株之间平均利福平MIC值差异无统计学意义(P=0.87),但两独立样本T检验分析显示,多重密码子突变株平均利福平MIC值(115.8 μg/mL)显著高于单密码子突变株平均利福平MIC值(48.4 tμg/mL)(t=2.659,P=0.016).利福平敏感株未发生错义突变.5.5％(6/109)的利福平耐药株仅在rpoB基因起始端发生突变,突变密码子分别是247,251和253.结论 531与526是常见突变密码子,且以单密码子突变为主;531与526单密码子突变株之间利福平耐药水平差异无统计学意义,但多重密码子突变株利福平耐药水平显著高于单密码子突变株利福平耐药水平;rpoB基因起始端突变可能是除利福平耐药决定区域之外导致利福平耐药的第2个耐药决定区;rpoB基因DNA序列分析有助于结核分枝杆菌利福平耐药表型和耐药水平的预测.
