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乙型肝炎病毒B基因亚型(Ba,Bj)半巢式PCR检测方法的建立
目的 建立一种灵敏特异且简便易行的乙型肝炎病毒(HBV)B基因Ba和Bj亚型分型方法.方法 用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的B基因型HBV(HBV/B)和C基因型HBV(HBV/C)的基因序列,分别设计出HBV/B型特异性引物HB及Ba和Bj基因亚型特异性引物BA和BJ.第一轮PCR反应以HBV/B型特异性引物HB作为上游引物,以日本学者Sugauchi等设计的引物HBAS-4V作为下游引物(外引物);第二轮PCR反应同样以HB作为上游引物,亚型特异性引物BA和BJ作为下游引物(内引物),在同一个反应管中进行.根据PCR产物片段的大小判定B基因亚型.随机选取实验室内经型特异性引物PCR法鉴定为HBV/B(56份)及经preS/S区序列测定证实为HBV/C(15份)的HBV慢性感染者血清标本共71份,以研究设计的引物进行半巢式PCR反应,检测Ba和Bj基因亚型,并以载有HBV Bj亚型基因组的质粒作为Bj亚型的阳性对照.然后随机选取15份B型样本的第一轮PCR产物直接测序,利用Blast和DNAStar软件将测序结果与GenBank中登录的Ba及Bj亚型序列进行同源性分析,验证该半巢式PCR法的准确性.结果 56份HBV/B血清标本经该半巢式PCR法检测,均为Ba亚型,随机选取的15份B型PCR产物直接测序,结果均为Ba亚型,与研究中应用的半巢式PCR方法检测结果一致.15份HBV/C的血清标本检测结果均为阴性.结论 建立了HBV Ba和Bj亚型半巢式PCR法.该方法灵敏、特异、简便、易行,可用于临床和流行病学大样本检测.
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阿德福韦酯治疗不同基因型慢性乙型肝炎124例疗效观察
目的:探讨阿德福韦酯治疗不同基因型慢性乙型肝炎的临床疗效,为优化治疗方案提供一定依据.方法:将124例慢性乙型肝炎患者按基因型检测结果分为B基因型组56例和C基因型组68例,所有患者均使用阿德福韦酯治疗,治疗12、24、48周后根据检查丙氨酸转氨酶(ALT)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)/乙型肝炎e抗体(抗-HBe)血清转换、血清乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)水平,判断疗效.结果:治疗前两组一般情况、血清各指标检测水平;治疗12、24、48周后ALT、HBeAg/抗-HBe、HBV-DNA水平,检测结果均无显著性(P>0.05).结论:阿德福韦酯治疗不同基因型慢性乙型肝炎具有良好疗效,治疗效果与HBV-DNA病毒基因型无明显相关性.
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乙型肝炎病毒B、C基因型全基因组序列的克隆
目的：构建乙型肝炎病毒（HBV ）B、C基因型全基因组序列克隆。方法从 HBV无症状慢性携带者中筛选B、C基因型，提取病毒核酸，设计引物，应用高保真酶对3200 bp的HBV DNA进行全序列扩增，通过克隆技术构建pGEM‐HBV重组质粒，测序后进行序列分析。结果获得 HBV B基因型和 HBV C基因型重组质粒各1株。结论成功构建 HBV B基因型和HBV C基因型的全基因组序列克隆，可为进一步研究HBV分子流行病学和基础研究提供工具。
