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一株宽宿主谱大肠埃希菌噬菌体的RNA比较分析及其环境微生物杀灭效应观察
目的通过比较研究一株分离自医院污水的宽宿主范围大肠埃希菌(E.coli)噬菌体与野生型单一宿主谱E.coli噬菌体的核酸序列和微生物杀灭效应等生物学特性的改变探讨噬菌体识别特异性机制和将噬菌体作为生物消毒剂应用于环境污水净化的可行性.方法采用抗体沉淀-盐酸胍一步法分别提取单一宿主谱E.coli噬菌体f2株及宽宿主谱E.coli噬菌体株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度;采用简并引物逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及随机引物随机扩增多态性DNA(RAPD)-PCR比较分析噬菌体宿主谱改变时核酸序列组成的变化;通过以上两噬菌体对环境样本中活菌和E.coli的杀灭效果的观察,比较分析宿主谱改变对噬菌体的微生物杀灭效应这一生物学特性的影响.结果噬菌体核酸分析试验证实,f2噬菌体及宽噬噬菌体均为6000 bp左右的单链RNA噬菌体.RAPD-PCR结果显示,两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPD-DNA片段有明显的差异,其中26条为可区分的DNA带型.利用简并引物进行的RT-PCR反应显示,噬菌体f2 cDNA在450 bp附近出现重复性较好的扩增片段,而宽噬噬菌体cDNA在相同条件下未出现扩增产物.环境水样本微生物杀灭试验结果显示,宽宿主谱株噬菌体对环境水样本中的E.coli杀灭率为36.75%～56.28%,对水样本中活菌杀灭率为30 84%～47.96%;而噬菌体f2对环境水样本中的E.coli杀灭率则为19.19%～35.06%,对水样本中活菌杀灭率为13.05%～27.85%.结论宽宿主谱噬菌体微生物杀灭率明显高于野生型单一宿主谱噬菌体f2(P=0.000);核酸分析证实两噬菌体宿主特异性裂解效应已从基因水平发生了变化.
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大肠埃希菌宽宿主谱噬菌体生物学特性的比较研究
目的 比较研究1株宿主谱发生突变的宽宿主范围噬菌体与其原始野生型单一宿主谱噬菌体株的生物学特性改变,探讨噬菌体识别特异性机制和将噬菌体作为生物消毒剂,应用于环境污水净化的可行性. 方法 利用大肠埃希菌285菌株自环境污水中筛选到1株具有宽宿主范围的噬菌体,与野生型噬菌体f2比较观察,分析宿主谱改变对噬菌体的生物学特性的影响. 结果 两噬菌体电镜下形态均为微球形且棱角不明显,但(噬菌体XY)颗粒偶见短尾,大小形态不均一;噬菌体f2和噬菌体XY的抗血清K值分别为30.1和41.5;噬菌体XY与噬菌体f2的相关度较低(K值比＜0.45);结果显示,噬菌体XY较噬菌体f2具有吸附速率高、潜伏期短、裂解量大的特点;两噬菌体均为约6 000 bp的单链RNA噬菌体,但宿主谱改变前后它们的RAPD-PCR及RT-PCR差异有统计学意义;噬菌体XY对环境水样本中的大肠埃希菌杀灭率可达到36.75%～56.28%,而噬菌体f2则为19.19%～35.06%(P＜0.01). 结论 宽宿主谱噬菌体较噬菌体f2在超微形态、一步生长曲线、抗原性等方面差异均有统计学意义;微生物杀灭效果也明显高于噬菌体f2(P＜0.01);核酸分析证实其宿主特异性裂解效应已从基因水平发生了变化.
