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实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体
目的 采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法.方法 根据汉赛巴通体特异的16S～23S rRNA间隔区序列设计引物和探针,以克隆的16S～23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900HT)上建立实时荧光定量检测方法,对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析,并且对模拟标本进行检测.结果 建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.997);与普通PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍.用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本,除军团菌检出微弱信号(2个拷贝)外,其余检出结果均为0;对重复性进行了评价,批内和批间的变异系数在0.2%～1.9%之间.用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本,在感染后第2天、第3天、第5天,检出少量的汉赛巴通体,在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体.结论 检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性,可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断.
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实时荧光定量PCR检测五日热巴通体
目的采用TaqMan-MGB探针建立检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)方法.方法根据五日热巴通体特异的16-23S rRNA间隔区序列设计引物和探针,以克隆的16-23S rRNA间隔区基因片段作DNA模板,建立了检测五日热巴通体实时荧光定量检测方法.结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.996);与普通PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度约为它的200倍.用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌,检出结果为阴性.实时荧光定量PCR检测五日热巴通体实验感染小鼠血、脾脏、肝脏和肺组织DNA样本,脾脏和肝脏样本中检出较高水平五日热巴通体DNA,血和肺部检出的目的DNA的水平较低. 结论本研究建立的检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR法具有很高的检测灵敏度和特异性,可用于临床患者血样本的检测,作五日热的早期诊断.
关键词： 五日热巴通体 实时定量PCR 16S-23S rRNA 巴通体感染
