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副衣原体BN9株成堆裸露颗粒的发现及其形成机制探讨
目的探索副衣原体在棘阿米巴内的生长发育变化特征.方法采用阿米巴共培养技术,通过染色和电镜观察了解不同时期滋养体中副衣原体生长的形态变化.结果在电镜下,可见副衣原体BN9存在典型的二个生活形态:即网织体和原体,在滋养体内可形成成熟的吞噬内体,网织体在吞噬内体内以二分裂方式繁殖,然后发育成成熟的原体颗粒,吞噬内体中,可见原体与网织体并存;胞浆中可见较多的游离原体颗粒.在成熟囊胞中,胞浆内可见较多的游离原体颗粒.感染后期,观察到成堆的的圆形裸露的颗粒,有原体和网织体,而宿主阿米巴的细胞结构已被溶解,吉姆尼兹染色表现为蓝紫色.结论副衣原体在阿米巴内可形成吞噬内体,出现二个发育期:网织体期和原体期,可发生胞内释放,反复形成吞噬体而复制繁殖,终导致阿米巴滋养体裂解或溶解;轻度感染的滋养体可发生囊胞化,成熟囊胞的胞浆内可携带有感染能力的原体颗粒.
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棘阿米巴性角膜炎诊断方法的研究进展
棘阿米巴是Acanthamoeba sp.属自由生活的阿米巴,广泛存在于土壤、海水、淡水、矿泉水及腐败物等自然环境中.目前已发现棘阿米巴有27种[1],其中某些致病性虫种可引起人类严重的致盲性眼部感染-棘阿米巴角膜炎(Acanthamoeba keratitis,AK).Jones等[2]于1973年报道了首例棘阿米巴性眼部感染,20世纪80年代中期开始,随着角膜接触镜的广泛使用,AK病例报道显著增多[3].
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阿米巴活体微培养法
目的建立一种既可做阿米巴与病原体共培养实验,又可连续观察阿米巴活体形态细微变化的培养技术.方法以24孔细胞培养板覆盖玻片为容器,37℃下微量悬滴将阿米巴与白色念珠菌共同培养,普通光学显微镜(×1000)下连续观察阿米巴的形态、活动能力、吞噬的细菌等情况.结果经微量悬滴培养在普通光学显微镜油镜下可连续观察阿米巴各种形态,滋养体呈T、K、Y字形态,并可连续观察吞噬白色念珠菌的过程.结论本法可观察到常规固定染色标本无法见到的阿米巴滋养体T、K、Y字形态及其吞噬白色念珠菌过程.
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军团菌与同一空调水环境中分离的自由生活阿米巴的共培养观察
目的:通过从同一环境的同一份水样中分别分离出自由生活阿米巴和军团菌,然后将两者在实验室条件下共培养,观察两者的形态,从而推测两者在自然环境下的相互关系.方法:用微孔滤膜过滤,盐酸处理和抗生素抑制杂菌的方法分别从同一份水样中分离军团菌和自由生活阿米巴,然后将两者在实验室条件下进行共培养;取片后Gimenes染色,普通光学显微镜下观察,72 h后收集共培养物做超薄切片电镜下观察,研究两者的形态.结果:分别分离到1株Ⅰ型嗜肺军团菌和一株棘阿米巴.两者进行共培养发现军团菌可以感染阿米巴,光镜下观察,8 h后阿米巴体内即可发现军团菌,24 h后开始增多,72 h后阿米巴滋养体呈高度寄生状态,玻片上可见被裂解的滋养体遗骸.电镜照片显示被吞食的军团菌被多层膜结构缠绕.结论:阿米巴吞噬细菌是一种缠绕吞噬的方式,水样中分离到的军团菌能在同样本中分离到的自由生活阿米巴内生长繁殖,从侧面证实环境水体中自由生活阿米巴是嗜肺军团菌的自然宿主.
