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059SOS/Umu试验及其应用
SOS/Umu试验(又称umu试验)是80年代中期发展起来的检测环境诱变物的短期筛选试验,它是基于DNA损伤物诱导SOS反应而表达umuC基因的基础上建立起来的.该方法具有快速、敏感、廉价等优点,因而被广泛应用于遗传毒理学研究、酶代动力学分析、环境监测与质量评估以及药效学评价和新药筛选等方面.本文对其实验原理、操作过程及其应用等作一综述.
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可用于TNT检测的新的生物传感元件topAp4的发现
目的：在大肠杆菌基因组中筛选可用于TNT检测的基因传感元件。方法利用随机酶切方法不完全酶切大肠杆菌K-12 MG1655基因组，构建基因组启动子文库，通过多轮筛选法获得可感应TNT的文库元件。通过数据库分析，并在灵敏度、特异性、起效时间各方面对新的传感元件在TNT诱导下的启动活性进行考察，进一步确证了文库元件中发挥作用的功能序列。结果和结论成功构建了大肠杆菌K-12 MG1655基因组启动子文库，并从中筛选得到了一个可感应TNT的文库元件，经过进一步分析确证了其发挥功能的序列topAp4，并在灵敏度、特异性、起效时间上都表现出较好的启动活性。上述研究工作发现了topAp4对TNT的感应作用，并验证了其具有较好的启动活性，为TNT检测生物传感器的构建打下了良好的基础。
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凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞茵LexA蛋白与其靶位点的特异性结合
目的:分析铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginoso,,PA)的LesA与其靶位点的特异性结合的特性.方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性.结果:构建了pET22b-LexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%,获得纯度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合.结论:推定Lex4结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点.
关键词： 铜绿假单胞菌 SOS反应 阻遏蛋白(LexA) 结合位点 -
整合子介导细菌耐药调控机制的研究进展
自从青霉素出现的半个多世纪以来,抗菌药物一直都是临床抗感染治疗的重要、有力武器.然而,近年来,随着抗菌药物的广泛使用甚至是滥用,细菌在抗菌药物的选择性压力作用下不断地产生耐药菌株,并且多重耐药菌株也在不断增加.在对细菌耐药机制的研究中,1989年Stokes和Hall提出了整合子-基因盒耐药系统的概念.整合子是细菌特别是革兰阴性菌中的一种可移动性基因元件,通常位于转座子、接合性质粒、噬菌体或染色体上.它能够识别外源性基因盒,通过位点特异性重组捕获或切除耐药性基因盒,并能使捕获的耐药性基因盒表达.在耐药基因的水平转移中,整合子起到了至关重要的作用.
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细菌对喹诺酮类药物耐药机制的研究进展
喹诺酮类药物是临床上常用的抗生素之一,但是随着喹诺酮药物的广泛应用,细菌对其耐药越来越严重.细菌对喹诺酮类产生耐受的机制主要有靶位点基因的突变和细胞内药物蓄积量的减少,还有新近提出的可传递质粒所编码的Qnr蛋白的保护机制.喹诺酮药物的使用与细菌的耐药性关系密切.本文就以上几个方面作一简要综述.
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颗粒裂解肽G13结构域引发细菌SOS反应
目的 利用自发光lux基因作为报告基因,检测颗粒裂解肽G13结构域对SOS启动子控制下的报告基因表达的影响.方法 pBAD-G13工程菌和鼠伤寒沙门菌Sa194混合培养,选取特定时间点测晕混合菌液的光吸收值和A600值,通过公式运算,计算其单位细菌产生的平均光吸收值.结果 重组G13结构域可诱导报告基因的表达,且诱导表达的水平具时间效应,呈现峰型图,在处理的开始阶段(4min左右)lux基因被强烈诱导表达并且达到峰值,随后lux基因表达水平逐渐平缓下降.结论 重组G13结构域引起细菌内SOS操纵子阻遏蛋白LexA蛋白的降解,诱导发生SOS反应.
关键词： 鼠伤寒沙门菌Sa194 G13结构域 SOS反应 Lux
