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HIV-1 CRF_BC重组亚型耐药相关新突变位点的复制动力学研究
目的：研究HIV-1 CRF_BC重组亚型逆转录酶（RT）区耐药相关新突变位点I132L、T139K/R对非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）药物敏感性和病毒复制动力的影响。方法通过点突变的方法将HIV-1 B亚型感染性克隆PNL4-3 RT区的第132位和第139位氨基酸分别突变为亮氨酸（L）和苏氨酸（T）/精氨酸（R），与本课题组已经构建的HIV-1 CRF07_BC亚型RT区I132L和T139K/R突变感染性克隆，共同转染293T细胞系进行病毒包装并检验病毒感染性。检测突变病毒对于NNRTIs的药物[依曲韦林（TMC-125)、地拉夫定(DLV)、奈韦拉平(NVP)、依非韦伦(EFV）]敏感性，及其复制动力学特征。结果通过点突变的方法成功构建感染性克隆PNL4-3-RT-I132L、PNL4-3-RT-T139K和PNL4-3-RT-T139R。I132L和T139K/R在B亚型和CRF07_BC亚型中均能降低HIV-1对于NNRTIs的药物敏感性，体现为半数有效浓度（EC50）的升高。在CRF07_BC亚型中，I132L分别使EC50升高2.55、19.35、28.05和6.13倍；T139K分别使EC50升高4.67、3.66、7.35、3.30倍；T139R分别使EC50升高1.82、4.69、25.12和1.89倍；在B亚型中，I132L分别使EC50升高3.91、4.61、6.38和3.56倍；T139K分别使EC50升高3.13、1.78、2.26和2.10倍；T139R分别使EC50升高5.79、3.99、5.78和2.75倍。PNL4-3-RT-132L/139K/139R与野毒株PNL4-3的复制速度相近，且P24均在第11天达到峰值。但与对照株BC-WT相比，BC-RT-I132L/T139R推迟了P24到达峰值的时间，BC-RT-T139R的P24值在第14天达到峰值，BC-RT-I132L在第21天达到峰值，且峰值略低。结论 HIV-1 CRF_BC RT区新的耐药相关位点I132L和T139K/R在B亚型及CRF07_BC亚型感染性克隆上均可降低病毒对NNRTIs的药物敏感性，I132L在CRF_07BC亚型的感染性克隆上能够降低病毒的复制能力。
