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囊型包虫病患者包囊钙化相关基因研究
目的 探寻与囊型包虫病患者包囊钙化相关的基因,从分子生物学水平提供判断患者预后情况的依据.方法 于2013年6月至2014年12月,收集前往宁夏3家医院就诊的32例囊型包虫病患者(10例进行mRNA基因芯片分析,22例进行Real-time PCR分析)和11例肝囊腺瘤患者的肝组织.采用基因表达差异显著性分析方法对10例囊型包虫病患者(钙化组与非钙化组各5例)的基因表达差异进行分析和筛选,用倍数变化衡量同一基因在两组之间表达量的变化情况.采用Real-timePCR在22例囊型包虫病患者(钙化组与非钙化组各11例)之间进行验证,以GAPDH作为内参基因,并用11例肝囊腺瘤患者进行标化,计算钙化组和非钙化组之间半乳糖凝集素4(LGALS4)和酸性神经酰胺酶(ASAH1)的相对表达量,并采用t'检验比较两组的差异.结果 经基因表达谱芯片筛选出5个表达有显著性差异的基因,且都在钙化组中表达下调,其中LGALS4和ASAH1下调程度较明显,倍数变化分别为0.008 8和0.020 3.Real-time PCR验证结果显示,LGALS4在钙化组的相对表达量为0.49±0.27,非钙化组为2.70±2.61,差异有统计学意义(t=-2.59,P=0.026);ASAH1在钙化组的相对表达量为1.36±0.33,非钙化组为1.68±0.67,差异无统计学意义(t=-1.44,P=0.167).在非钙化组中,LGALS4和ASAH1的表达量波动范围较大,且两者表达量变化的趋势呈正相关(r=0.91,P=O.001),即LGALS4表达量较低的患者其ASAH1表达量也相对较低.结论 LGALS4和ASAH1在发生钙化的囊型包虫病患者中低表达,可能成为判断囊型包虫病自愈倾向的标志基因.
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酸性神经酰胺酶基因与精神分裂症症状数量性状的关联研究
目的 探讨酸性神经酰胺酶基因(ASAH1)与精神分裂症症状数量性状的关联.方法 应用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性技术,对254例精神分裂症患者ASAH1基因的3个单核苷酸多态性(rs3753118、rs3753116及rs7830490)进行检测;使用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者疾病表型的数量性状.结果 (1)患者rs3753118位点3种基因型间的阳性症状分的差异有统计学意义(F=3.506,P＜0.05);rs3753116位点3种基因型间的PANSS总分及阴性症状分的差异均有统计学意义(F=3.548,P＜0.05;F=3.358,P＜0.05).经两两比较,rs3753118位点C/C基因型组患者的阳性症状分及一般精神病理分明显高于C/T基因型组患者;rs3753116位点G/G基因型组患者的PANSS总分及阴性症状分明显高于A/G基因型组患者,且G/G基因型组患者的阴性症状分明显高于A/A基因型组患者,差异均有统计学意义(P均＜0.05).(2)患者3个位点各等位基因间的PANSS量表评分的差异无统计学意义(P＞0.05).(3)患者rs3753118C-rs3753116G单体型者及rs3753118C-rs3753116G-rs7830490A单体型者,其PANSS总分及阴性症状分均明显高于参照单体型者,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 ASAH1基因区域可能存在精神分裂症症状数量性状位点.
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酸性神经酰胺酶shRNA表达载体的构建及鉴定
目的 构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因表达的短发夹RNA (shorthairpin RNA,shRNA)载体,筛选出基因沉默效果明显的shRNA,以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响.方法 针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒,转染人肾上皮细胞系293T细胞,通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果明显的shRNA序列,以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,验证其对这些细胞的基因沉默效果.结果 4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低,其中sh1340的抑制效果明显.sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z (79.3±0.5)％和Hep-2(80.7±5.1)％.结论 成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体,为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础.
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鞘磷脂类信号通路在肺纤维化发病机制中的作用
肺纤维化是一组由多种病因引起的慢性肺部疾病，其病理特征包括肺组织炎性损伤、组织结构破坏、间充质胶原增多及细胞外基质沉积。其病因复杂，大部分肺纤维化疾病目前尚无有效的治疗方法。近几年研究表明，鞘磷脂类信号通路的激活与肺纤维化关系密切。本文综述了鞘磷脂类信号通路的组成、功能及其在肺纤维化中的作用，为深入探讨肺纤维化发病机制及其防治方法提供新思路。
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乳腺癌ASAH1、Bcl-2蛋白表达及其临床意义的研究
目的 探讨酸性神经酰胺酶(N-acylsphingosineamidohydrolase 1,ASAH1)蛋白在乳腺癌中的表达及临床.方法 应用免疫组织化学法分别检测73例乳腺癌、25例正常对照组标本(来自乳腺癌患者乳房全切除后所切取的正常乳腺组织)ASAH1及Bcl -2蛋白的表达及与临床病理特征和预后的关系.结果 ASAH1在乳腺癌中表达阳性率为72.6％,Bcl -2在乳腺癌中阳性率为65.8％.与正常乳腺组织表达比较,差异有统计学意义(P＜0.05).二者具有相关性.结论 ASAH1、Bcl-2蛋白在乳腺癌组织中表达增强,ASAH1及Bcl-2蛋白蛋白表达增强预示生存率低.
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酸性神经酰胺酶抑制剂的研究进展
酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)是位于溶酶体内的神经酰胺(ceramide,Cer)代谢酶,能够调节神经酰胺(Cer)/鞘氨醇(sphingosine,Sph)/1-磷酸鞘氨醇(sphingosine1-phosphate,S1P)之间的相互代谢平衡.而Cer和S1P已被公认是调控细胞生长、增殖和死亡的重要信号分子,AC的过量表达,可使S1P水平升高,产生抗细胞凋亡效应.因此,AC有希望成为癌症治疗的全新靶点之一,通过抑制AC活性,诱导肿瘤细胞凋亡,为癌症治疗提供了新思路.本文对近年来AC抑制剂的研究进展进行综述.
关键词： 酸性神经酰胺酶 酸性神经酰胺酶抑制剂 构效关系 -
ASAH1表达与luminal A型乳腺癌淋巴结转移的关系及其临床意义
目的:探讨酸性神经酰胺酶(ASAH1)表达与luminal A型乳腺癌淋巴结转移的关系及其与临床病理指标和预后的关系.方法:应用实时定量PCR检测1 12例luminal A型乳腺癌组织中ASAH1 mRNA表达,并分析ASAH1表达与淋巴结转移等临床病理指标及预后的关系.结果:淋巴结转移的乳腺癌患者肿瘤组织中ASAH1表达显著高于没有淋巴结转移的患者,差异具有统计学意义(P＜0.05).ASAH1表达与淋巴结转移等临床病理指标的相关性分析结果显示肿瘤大小、微淋巴管密度和淋巴结转移与ASAH1表达显著相关(P＜0.05).ASAH1高表达的患者无进展生存率显著低于ASAH1低表达的患者(HR=0.367,95％ CI 0.133～1.007,P=0.040).结论:ASAH1表达与luminal A型乳腺癌淋巴结转移密切相关,检测肿瘤组织中ASAH1表达对判断luminal A乳腺癌淋巴结转移和预后具有重要意义.
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脑胶质瘤组织中ASAH1、 TGF-β1、Caspase-3蛋白表达变化及其意义
目的 观察脑胶质瘤组织中酸性神经酰胺酶(ASAH1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达变化,并探讨其意义.方法 脑胶质瘤组织70例份[观察组,按WHO胶质瘤分类标准分为低级别者(Ⅰ～Ⅱ级)32例、高级别者(Ⅲ～Ⅳ级)38例)],癌旁组织70例份(对照组),采用免疫组化SP法检测两组ASAH1、TGF-β1、Caspase-3蛋白;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较观察组ASAH1、TGF-β1、Caspase-3蛋白阳性表达者及阴性表达者的生存时间;Spearman相关分析法分析观察组ASAH1、TGF-β1、Caspase-3蛋白表达的相关性.结果 观察组ASAH1、TGF-β1、Caspase-3蛋白阳性率分别为81.42％、87.14％、75.71％,对照组分别为16.67％、33.33％、25.00％,两组比较,P均＜0.05.观察组低、高级别者ASAH1蛋白阳性率分别为68.75％、92.10％,TGF-β1蛋白阳性率分别为81.25％、92.10％,Caspase-3蛋白阳性率分别为87.50％、65.79％,两者比较,P均＜0.05.ASAH1蛋白表达阳性者(57例)与阴性者(13例)中位生存时间分别为10、23个月,TGF-β1蛋白表达阳性者(61例)与阴性者(9例)中位生存时间分别为10、20个月,Caspase-3表达阳性者(53例)与阴性者(17例)中位生存时间分别为13个月、6个月,两者比较,P均＜0.05.观察组ASAH1蛋白与TGF-β1表达呈正相关(r=0.652,P＜0.05),ASAH1、TGF-β1与Caspase-3表达均呈负相关(r=-0.427、-0.317,P均＜0.05).结论 脑胶质瘤组织中ASAH1、TGF-β1、Caspase-3蛋白表达升高,检测上述蛋白有助于脑胶质瘤的病情判断及预后评估.
