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苏木对C57BL/6荷瘤小鼠骨髓CK18、CK19 表达影响的实验研究
目的 通过检测荷瘤小鼠骨髓中细胞角蛋白CK18、CK19的mRNA表达,研究苏木对肿瘤转移的影响.方法 建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠肿瘤模型,将小鼠随机分为苏木低剂量组(SML组)、苏木高剂量组(SMH组)、化疗组(CTX组)、化疗+苏木低剂量组(CTX+SML组)、化疗+苏木高剂量组(CTX+SMH组)、荷瘤对照组(NS组)6组,分别给予不同剂量苏木煎剂灌胃(每日1次)、环磷酰胺(接种后24 h腹腔内注射1次).在实验的第7、14、21天分批处死小鼠,摘取肺脏,观察肺转移灶;并采用实时定量PCR技术检测小鼠骨髓CK18、CK19的mRNA表达.结果 CK18 mRNA表达,第7天CTX组和CTX+SMH组、第14天SMH组和CTX+SMH组、第21天CTX+SMH组与同时点NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01、P<0.01).CK19mRNA表达.第7天SMH组、CTX+SMI.组、CTX+SMH组与NS组比较,差异有统计学意义(P值均<0.05);CTX+SMH组与CTX组比较,差异有统计学意义(P<0.05);第14天、第21天各用药组均较NS组表达低,差异无统计学意义(P>0.05).各组小鼠第7、14天均未见肺转移灶,第21天各组均町见肺转移灶;用药各组肺转移灶数目均少于NS组,与NS组比较差异均有统计学意义,SML组(P=0.01 17)、SMH组(P=0.0042)、CTX组(P=0.0001)、CTX+SML组(P=0.0001),CTX+SMH组(P=0.0001);CTX+SML组的肺转移灶少于CTX组(P=0.0237).各组肺转移灶的形态也存在较大差异.结论 苏木具有抑制肿瘤转移的作用,苏木加化疗的抑制作用优于单纯化疗或者单纯苏木治疗.
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CK19作为微转移癌检测基因标志的假基因干扰及解决方法
基因标志的选择是微转移得到正确检出的关键.细胞角蛋白家族中的CK19(cytokeratin 19)作为上皮组织来源的组织特异性标志,是文献报道中检测微转移应用多的基因标志,但研究报道结果不同,甚至相反.本研究目的在于验证RT-PCR方法检测CK19基因表达时存在的假基因干扰[1],并通过方法优化解决假基因干扰问题,从而建立适于临床应用的乳腺癌微转移检测方法.
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非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的表达及与临床的关系
目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)mRNA的表达变化及与临床的关系.方法:采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法进行外周血CK19 mRNA表达的测定.结果:NSCLC组患者外周血CK19 mRNA的阳性率为60.7%,显著高于良性病变组的3.3%和健康对照组的0(P＜0.01);Ⅲ和Ⅳ期NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ和Ⅱ期患者的阳性率(P＜0.05);而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性率之间无显著性差异(P＞0.05).结论:外周血CK19 mRNA的检测有助于我们对NSCLC患者的病情、预后和治疗进行判断,且这并不受病理分型的影响.
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荧光定量PCR技术检测乳腺癌ck19 mRNA表达过量的意义
目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测细胞角蛋白19(ck19)在乳腺癌诊断中的应用.方法采用FQ-PCR法,并以GAPDH为内对照测定15例健康女性体检者、25例良性乳腺疾病患者和76例乳腺癌患者的外周血中ck19 mRNA的表达量.结果正常对照组和良性乳腺疾病组ck19和ck19/GAPDH无显著性差异,乳腺癌组均显著高于前2组,GAPDH在3组间均无显著性差异.若以ck19基因表达量和ck19/GAPDH高于正常对照组+2s为阳性,76例乳腺癌患者的阳性数为41,阳性率53.9%,良性乳腺疾病组阳性数为0.76例乳腺癌中27例患者从手术前到第3次检测,ck19和ck19/GAPDH均显下降趋势,但第1次和第2次与手术前比较,无显著性差异,而第3次与手术前比较,ck19和ck19/GAPDH均显著低于手术前,存在显著性差异.结论 FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测ck19基因的方法,可有效监测乳腺癌的诊断、治疗和预后.
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实时荧光定量RT-PCR检测肺癌、癌旁组织及外周血中CK19 mRNA的表达及临床意义
目的探讨角蛋白CK19在肺癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表达特点及其临床意义.方法采用实时荧光定量RT-PCR的方法对62例肺癌患者癌和癌旁组织内CK19 mRNA表达进行检测,并与其对应的外周血中的CK19 mRNA表达结果进行比较.结果62例肺癌患者的癌和癌旁组织和外周血中CK19 mRNA均有表达(分别为61.2%、32.2%、40.3%),而肺癌组织中CK19 mRNA水平明显高于癌旁组织,两者差异显著(P＜0.05).外周血中CK19 mRNA的表达与临床分期和病理类型无关;却与肺癌组织中CK19 mRNA的高表达水平及淋巴结是否转移密切相关;健康对照组则无阳性.结论实时荧光定量RT-PCR方法检测肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达有较高的敏感性和特异性,且操作方便,在肿瘤微转移的诊断监测方面有一定的应用价值.
关键词： 细胞角蛋白CK19 肺癌 实时荧光定量RT-PCR
