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23S rRNA通用引物的设计及在气性坏疽快速检测中的应用
目的 设计23S rRNA通用引物并将其用于气性坏疽快速检测基因芯片.方法 (1)设计23S rRNA通用引物,并对气性坏疽的主要致病菌进行聚合酶链反应(PCR)扩增.(2)对外伤感染中常见其他微生物进行检测.(3)测定该通用引物PCR的灵敏度.结果 (1)设计出1对23S rRNA通用引物,该通用引物对气性坏疽主要病原菌都能进行扩增.(2)该通用引物PCR对外伤感染中常见非梭菌微生物都不扩增.(3)该通用引物PCR的高灵敏度为1×103 cfu/mL(产气荚膜梭菌).结论 设计出了1对23S rRNA通用引物,能够满足气性坏疽快速检测基因芯片的要求.
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大环内酯类耐药卡他莫拉菌23S rRNA基因突变位点与临床特点分析
目的:研究大环内酯类耐药卡他莫拉茵的临床特点、药敏及耐药机制.方法:留取住院社区获得性下呼吸道感染患儿痰标本分离48株卡他莫拉茵,建株保存,分析卡他莫拉茵对大环内酯类敏感及耐药患儿的临床特点;采用K-B法进行药敏试验,头孢硝噻吩色原法测定B-内酰胺酶,聚合酶链反应(PCR)及序列分析大环内酯类耐药机制.结果:48株卡他莫拉茵β-内酰胺酶的产酶率为93.8％ (45/48);卡他莫拉茵对红霉素和阿奇霉素耐药率分别为56.3％和41.7％.在23S rRNA突变位点检测中,A2982T、C3132T等突变位点与大环内酯类耐药可能有关,未发现erm1A、ermB、mefA及merE等耐药基因.耐药组更多表现为喘息、肺部喘鸣音,与敏感组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:卡他莫拉茵B-内酰胺酶的产酶率、对大环内酯类的耐药性均日益增加,大环内酯类耐药组患儿更多表现为喘息,卡他莫拉茵耐药机制可能与23S rRNA位点发生突变有关.
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EVAGreen实时荧光定量PCR检测类志贺邻单胞菌的方法建立
目的 建立实时荧光定量PCR快速检测类志贺邻单胞菌的方法.方法 以类志贺邻单胞菌23S rRNA基因为目标设计引物,使用EVAGreen染料建立实时荧光定量PCR方法并优化反应条件,构建重组质粒作为标准DNA,建立标准曲线；评估该方法的灵敏度、重复性和特异性,并将所建方法用于粪便模拟样品的检测,与常规培养法比较.结果 在反应体系为10μl,模板为1μl的条件下,该方法可测的低拷贝数为2.18×101拷贝/体系；重组质粒标准建立的标准曲线具有较大的线性范围(108～102 copies/μl)；批间差异小于5％,批内差异小于3％；特异性试验中类志贺邻单胞菌检测结果均为阳性,其他常见肠道致病菌、常见弧菌以及常见正常肠道菌均为阴性；粪便模拟样品前增菌处理后检测灵敏度为25 cfu/10 ml增菌液,检测结果和传统培养法相符.结论 成功建立EVAGreen实时荧光定量PCR方法,该方法的建立为类志贺邻单胞菌的检测提供了一种简便、快捷的途径,并可对样品中类志贺邻单胞菌进行快速定量检测.
