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甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用
目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg·L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用；取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg·L-1)作用24 h后,Hoeehst 33258染色法观察细胞凋亡形态；取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg·L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率；RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达；荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性.结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC.011.3 mg·L-1,在5～15 mg·L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高；甘草查尔酮B(10,12.5 mg·L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg·L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg·L-1高.结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡.
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RP-HPLC法同时测定不同产地甘草中9个主要成分的含量
目的:建立同时测定甘草药材中芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸含量的高效液相色谱方法.方法:采用DiamonsilTM C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为276 nm(0 ～20 min)、360 nm(20 ～30 min)、276nm(30～35 min)、370 nm(35 ～48 min)、248 nm(48 ～55 min),柱温为40℃.结果:芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸的浓度分别在13.1-262 μg·mL-1(r =0.9994)、8.3-100 μg·mL-1(r =0.9997)、5.2～104μg·mL-1(r =0.9997)、0.96 ～11.5 μg ·mL-1(r =0.9995)、0.31～10.00μg ·mL-1(r =0.9999)、1.11 ～22.2 μg·mL-1(r =0.9991)、0.23 ～7.25 μg·mL-1(r =0.9998)、0.52 ～10.40μg· mL-1(r =0.9996)、25.25 ～808.Oμg ·mL-1(r=0.9995)与各自峰面积值呈良好的线性关系；平均回收率(n=6)分别为103.6％、104.5％、104.9％、100.4％、102.2％、101.5％、100.4％、98.5％、101.7％.结论:本方法简便,重复性好,可以更好地用于甘草药材的质量控制.
