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甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响
目的 研究甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,探讨甘草解毒的作用机制.方法 采用流式细胞仪检测经甘草黄酮类成分处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Westernblotting法检测甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-gp表达的影响.结果 与对照组相比,甘草总黄酮5、10、50、100 μg/mL作用Caco-2细胞1h后,使细胞内罗丹明123的荧光强度分别减少61.1％、56.3％、49.2％、45.4％；甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷、芹糖基异甘草苷在相同质量浓度,使细胞内罗丹明123的荧光强度减少了19.3％～37.9％.与对照组相比,甘草总黄酮10～400 μg/mL给药后72 h,使Caco-2细胞膜上P-gp的表达显著增加(P＜0.01)；甘草苷、异甘草苷、甘草素、芹糖基甘草苷5～400 μmol/L,异甘草素、芹糖基异甘草苷10～400 μmol/L对此也有显著作用(P＜0.01).结论 甘草黄酮类成分增强Caco-2细胞P-gp的功能,上调P-gp的表达,促进细胞内有毒物质的外排,减少有毒物质在肠道的吸收,这可能是甘草配伍其他中药的解毒机制之一.
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RP-HPLC法同时测定不同产地甘草中9个主要成分的含量
目的:建立同时测定甘草药材中芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸含量的高效液相色谱方法.方法:采用DiamonsilTM C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为276 nm(0 ～20 min)、360 nm(20 ～30 min)、276nm(30～35 min)、370 nm(35 ～48 min)、248 nm(48 ～55 min),柱温为40℃.结果:芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸的浓度分别在13.1-262 μg·mL-1(r =0.9994)、8.3-100 μg·mL-1(r =0.9997)、5.2～104μg·mL-1(r =0.9997)、0.96 ～11.5 μg ·mL-1(r =0.9995)、0.31～10.00μg ·mL-1(r =0.9999)、1.11 ～22.2 μg·mL-1(r =0.9991)、0.23 ～7.25 μg·mL-1(r =0.9998)、0.52 ～10.40μg· mL-1(r =0.9996)、25.25 ～808.Oμg ·mL-1(r=0.9995)与各自峰面积值呈良好的线性关系；平均回收率(n=6)分别为103.6％、104.5％、104.9％、100.4％、102.2％、101.5％、100.4％、98.5％、101.7％.结论:本方法简便,重复性好,可以更好地用于甘草药材的质量控制.
