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神经营养因子-3在涎腺腺样囊性癌中的表达及其意义
目的:通过检测神经营养因子-3(NT-3)在涎腺腺样囊性癌(ACC)的表达情况,探讨NT-3与ACC嗜神经侵袭的关系.方法:以32例ACC、7例正常腮腺及3例腺泡细胞癌标本为研究对象,采用免疫组化法对NT-3进行检测.结果:NT-3在正常腮腺的导管细胞表达为阳性;在腺泡细胞癌为阴性;在ACC病例中的阳性率为93.8%(30/32).按病理学表现分组时,存在嗜神经现象组的NT-3表达水平明显高于未见嗜神经现象组(P＜0.05).存在嗜神经现象组的大部分切片中神经束普遍较相应的正常腮腺组织或腺泡细胞癌密集,且有4例ACC可见沿神经周分布的肿瘤细胞的染色强度明显高于远离神经者.结论:NT-3可能作为ACC嗜神经侵袭的生物学标志.ACC中NT-3表达的增强可能是促进其嗜神经侵袭的原因之一.
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缺氧调控表达的 NT-3逆转录病毒载体的构建及鉴定
目的：构建与鉴定含有5个拷贝缺氧反应元件(five copies of hypoxia responsive elements,5 HRE)的缺氧调控表达的神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的逆转录病毒载体。方法用 PCR、酶切和连接等分子克隆技术将5 HRE 和人来源 NT-3片段克隆入逆转录病毒载体 pLNCX 中,构建重组逆转录病毒穿梭质粒 pLNCX-5 HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。经 PT67包装细胞包装、高速离心纯化和浓缩等方法,获得逆转录病毒 RV-5 HRE-NT3；用逆转录病毒感染 NIH 3T3细胞48 h 后,流式细胞仪检测并计算出病毒滴度。结果成功构建了重组逆转录病毒载体质粒pLNCX-5 HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并获得相应的逆转录病毒 RV-5 HRE-NT3,经过高速离心纯化和浓缩后,其滴度可达9.1×106 cfu/mL。结论成功构建了缺氧调控表达的 NT-3逆转录病毒载体,为研究外源基因的缺氧调控特异性表达奠定了工作基础。
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马尾神经压迫性损伤对大鼠骶髓神经营养因子-3表达的影响
目的:探讨马尾神经压迫性损伤后不同时间骶髓神经元中神经营养因子-3的表达变化.方法:复制马尾神经压迫性损伤模型.于术后不同时间(1、7、21 d),将动物过量戊巴比妥钠麻醉,心脏灌注后取骶髓(S2-3),固定及切片后,用兔抗NT-3抗体行免疫组化ABC法染色.观察并测量各组骶髓神经元NT-3的阳性神经元数.结果:NT-3免疫阳性反应产物主要在骶髓神经元胞浆着色.腹角的NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后7 d组和21 d组较正常组和24 h组明显增高(P＜0.05);背角的NT-3阳性神经元数从术后24 h至术后7 d进行性减少,而术后21 d时则增加并高过正常水平(P＜0.05).结论:NT-3不仅参与脊髓的正常生理活动,而且可能与脊髓挤压伤的早期修复有关.
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移植分泌神经营养因子-3的人胚神经干细胞对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响
目的 探索Lentivirus介导神经营养因子(NT-3)转染的人胚神经干细胞(human neural stem cells, hNSCs)对大鼠损伤脊髓治疗机制和治疗的作用机制.方法 在体外用Lentivirus构建同时表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)和NT-3的hNSCs,将其移植到T10脊髓半横断损伤的大鼠体内,用荧光显微镜和BBB评分观察体内转基因表达和大鼠功能恢复情况,用免疫组化染色检测移植细胞在体内存活分化情况.结果 (1)在体外用Lentivirus成功构建了同时表达多基因的人胚基因工程NSC并检测到了稳定的转基因表达;(2)用荧光显微镜可以检测到到hNSC,能在体内长时间存活并表达转基因;(3)BBB评分检测到hNSCs移植组大鼠后肢功能有明显恢复;(4)移植的基因工程hNSC能在体内分化为神经元及星形胶质细胞等功能细胞.结论 Lentivirus介导NT-3转染的hNSC能够调整损伤的局部微环境促进损伤脊髓的功能恢复.
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Lentivirus介导神经营养因子-3促进脊髓损伤大鼠功能恢复
目的探讨Lentivirus介导分泌神经营养因子-3(NT-3)直接体内转基因治疗大鼠脊髓损伤作用和机制. 方法将28只Wistar大鼠在T10水平制成半横断损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,每组14只;用携带NT-3和绿色荧光蛋白(GFP)的Lentivirus对大鼠行直接体内转基因治疗;荧光显微镜观察体内转基因表达,后肢运动功能评分法(BBB评分)检测大鼠后肢功能恢复情况. 结果用荧光显微镜检测到损伤脊髓内有较多的持续表达转基因的细胞;BBB评分结果显示,从伤后第4周开始,实验组大鼠后肢功能较对照组明显恢复(P＜0.01),至第10周时,实验组和对照组BBB分差增大,达3.3分. 结论 Lentivirus是一种有效的转基因载体,由Lentivirus介导分泌NT-3的直接体内转基因治疗能够明显促进损伤脊髓的功能恢复.
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层粘连蛋白靶向NT3促进创伤性脑损伤的修复研究
目的：研制能与层粘连蛋白牢固结合的含有层粘连蛋白(laminin)结合域的NT3(LBD-NT3)，探讨其与损伤后增多的层粘连蛋白结合促进脑损伤的修复机理。方法46只SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、假手术组(8只)、PBS组(10只)、NT3组(10只)、LBD-NT3组(10只)，制作液压打击模型后注射对应的PBS或因子，利用水迷宫实验进行行为学评分，1个月后处死大鼠，通过大鼠脑组织免疫荧光染色，比较各组神经元和胶质细胞的增减，用SPSS 19.0统计学做统计分析。结果 LBD-NT3组大鼠的水迷宫实验表现更好，和假手术组大鼠相比，P=0.845>0.05；与空白对照组相比，P=0.956>0.05；与PBS相比，P=0.006<0.05；与NT3组相比，P=0.089>0.05。笔者进一步得出，第17、18天，NT3组大鼠和LBD-NT3组有显著性差异，P<0.05。神经元细胞较多，胶质细胞较少，LBD-NT3与PBS组、NT3组差异具有统计学意义（P<0.05），与空白对照组、假手术组未见统计学差异。结论 LBD-NT3和体内增多的laminin结合后，大鼠脑组织损伤相对较小，周围的神经元较多，胶质细胞较少，功能保留较好。
