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白花蛇舌草-半枝莲药对组分诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制
目的:考察白花蛇舌草-半枝莲药对的活性组分诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及其作用机制.方法:超高效液相色谱法对药对活性组分中化学成分进行测定, 噻唑蓝 (MTT) 比色法检测细胞体外增殖力, 克隆形成实验考察克隆形成的数量变化, 流式细胞仪检测凋亡细胞的比例, 蛋白质免疫印迹法检测蛋白及信号通路的变化.结果:制备药对以3种配比 (1∶1, 1∶2, 2∶1) 进行水煎后脱脂浸膏的乙酸乙酯组分 (YDW11, YDW12, YDW21) .YDW11含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种成分.通过比对这3个组分对乳腺正常上皮细胞10A1和三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外增殖的影响, 发现YDW11在2550 mg·L-1对10A1细胞无细胞毒性, 且抑制MDA-MB-231的体外增殖 (P＜0.01), 其抑制活性强于YDW12, YDW21.YDW11呈质量浓度和时间依赖性抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231, HS578T, BT549的体外增殖 (P＜0.05, P＜0.01), 但对MCF-7体外增殖影响不大.YDW11呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231的克隆形成 (P＜0.01), 并诱导其凋亡 (P＜0.01) .YDW11提高p21 mRNA和蛋白表达的同时, 抑制增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 (P＜0.05, P＜0.01), 抑制丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 信号通路中p38, c-Jun氨基末端激酶 (JNK), 细胞外调节蛋白激酶 (ERK) 的磷酸化 (P＜0.05) .YDW11处理MDA-MB-231后, VASP在Ser157位点和Ser239位点的磷酸化水平提高 (P＜0.05, P＜0.01), 提示激活环状核苷酸 (c AMP) 和环磷酸鸟苷 (c GMP) 信号通路的活化.结论:白花蛇舌草-半枝莲药对等比配伍的乙酸乙酯组分 (YDW11) 在对乳腺正常上皮细胞10A1无毒的剂量25, 50 mg·L-1, 呈剂量和时间依赖性显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDAMB-231的体外增殖、克隆形成并诱导凋亡.呈浓度依赖性提高周期抑制蛋白p21在mRNA和蛋白的表达水平, 抑制PCNA的表达, 抑制p38, JNK, ERK的磷酸化水平, 提高VASP在Ser157和Ser239位点的磷酸化, 部分通过c AMP/c GMP和抑制MAPK信号通路而诱导MDA-MB-231的凋亡.
