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白花蛇舌草-半枝莲药对组分诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制
目的:考察白花蛇舌草-半枝莲药对的活性组分诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及其作用机制.方法:超高效液相色谱法对药对活性组分中化学成分进行测定, 噻唑蓝 (MTT) 比色法检测细胞体外增殖力, 克隆形成实验考察克隆形成的数量变化, 流式细胞仪检测凋亡细胞的比例, 蛋白质免疫印迹法检测蛋白及信号通路的变化.结果:制备药对以3种配比 (1∶1, 1∶2, 2∶1) 进行水煎后脱脂浸膏的乙酸乙酯组分 (YDW11, YDW12, YDW21) .YDW11含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种成分.通过比对这3个组分对乳腺正常上皮细胞10A1和三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外增殖的影响, 发现YDW11在2550 mg·L-1对10A1细胞无细胞毒性, 且抑制MDA-MB-231的体外增殖 (P＜0.01), 其抑制活性强于YDW12, YDW21.YDW11呈质量浓度和时间依赖性抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231, HS578T, BT549的体外增殖 (P＜0.05, P＜0.01), 但对MCF-7体外增殖影响不大.YDW11呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231的克隆形成 (P＜0.01), 并诱导其凋亡 (P＜0.01) .YDW11提高p21 mRNA和蛋白表达的同时, 抑制增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 (P＜0.05, P＜0.01), 抑制丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 信号通路中p38, c-Jun氨基末端激酶 (JNK), 细胞外调节蛋白激酶 (ERK) 的磷酸化 (P＜0.05) .YDW11处理MDA-MB-231后, VASP在Ser157位点和Ser239位点的磷酸化水平提高 (P＜0.05, P＜0.01), 提示激活环状核苷酸 (c AMP) 和环磷酸鸟苷 (c GMP) 信号通路的活化.结论:白花蛇舌草-半枝莲药对等比配伍的乙酸乙酯组分 (YDW11) 在对乳腺正常上皮细胞10A1无毒的剂量25, 50 mg·L-1, 呈剂量和时间依赖性显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDAMB-231的体外增殖、克隆形成并诱导凋亡.呈浓度依赖性提高周期抑制蛋白p21在mRNA和蛋白的表达水平, 抑制PCNA的表达, 抑制p38, JNK, ERK的磷酸化水平, 提高VASP在Ser157和Ser239位点的磷酸化, 部分通过c AMP/c GMP和抑制MAPK信号通路而诱导MDA-MB-231的凋亡.
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叶酸对胎鼠大脑神经干细胞增殖蛋白表达影响
目的 研究叶酸对胎鼠大脑神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其作用机制.方法 采用孕14～16 d SD胎鼠,进行NSCs原代培养.将NSCs分为4组:对照组、叶酸缺乏组、叶酸低剂量组、叶酸高剂量组.收集培养6 d的细胞,采用5-溴脱氧尿苷(BrdU)掺入法和免疫组化双标记检测NSCs的增殖情况,采用蛋白印迹法(Western blot)检测胎鼠增殖期NSCs活化的细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)的表达含量.结果 叶酸低剂量组、高剂量组BrdU+巢蛋白(Nestin)阳性细胞占总细胞(70.5±2.7),(78.8±6.9)%与对照组(64.2±8.9)%比较,差异均有统计学意义,且高剂量组明显高于低剂量组(P＜0.05);叶酸低剂量组、高剂量组pERK1蛋白的表达(0.407±0.018),(0.443±0.019)与对照组(0.388±0.011)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).叶酸低剂量组、高剂量组pERK2蛋白的表达(0.547±0.044),(0.563±0.041)与对照组(0.507±0.018)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 叶酸能够促进胎鼠NSCs的增值,其作用机制可能是通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路调节NSCs的增殖.
关键词： 叶酸 神经干细胞 增殖 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路 -
miR-23b通过MAPK信号通路对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用
目的 研究microRNA(miR)-23b对H2O2诱导的人血管内皮细胞(HUVECs)损伤中的保护作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用.方法 体外培养HUVECs,利用细胞转染法对HUVECs转染miR-23b mimic,同时转染miR-23b mimic阳性对照作为对照,分别对转染的细胞用100μmol/L H2 O2诱导造成HUVECs氧化应激损伤,qRT-PCR法检测细胞中miR-23b水平,流式细胞术检测HUVECs凋亡情况,Western印迹检测细胞中MAPKs信号通路中p38-MAPK、磷酸化(p-)p38-MAPK(p-p38)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,并测定细胞中丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性.用MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理上调miR-23b的H2 O2诱导的HUVECs,同样的方法检测细胞中p38-MAPK、p-p38、Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及细胞中MDA、SOD、LDH活性.结果 转染miR-23b-mimic后细胞中miR-23b的表达水平明显升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0.05).转染后经H2O2处理的HUVECs miR-23b水平显著升高,细胞凋亡率明显降低,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平降低,细胞中p38-MAPK、p-p38的表达下调,SOD活性降低,MDA含量增加,LDH活性升高,与转染对照经H2 O2处理的HUVECs相比,差异具有统计学意义(P<0.05).MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理后,HUVECs中p38-MAPK和p-p38表达升高,SOD活性升高,MDA含量减少,LDH活性降低,与上调miR-23b的H2O2诱导的HUVECs相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 上调miR-23b可减少H2 O2诱导的HUVECs凋亡,减少对细胞的损伤,对H2 O2诱导的HUVECs起到保护作用,其作用机制与抑制MAPK信号通路的激活有关.
