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奥沙利铂和7-羟基星形孢菌素联合用药对HCT116细胞的抑杀作用
目的:观察奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)与7-羟基星形孢菌素(7-hydroxystaurosporine,UCN-01)单独及联合应用对结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,探讨其诱导细胞死亡的作用机制.方法:应用MTT法检测L-OHP,UCN-01单药及联用对HCT116细胞的增殖抑制作用；应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理的结肠癌细胞凋亡；应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变.结果:低浓度L-OHP(6.25 μmol·L-1)与UCN-01(100 nmol·L-1)联用对结肠癌HCT116细胞的杀伤可产生协同作用,效果明显强于单独用药组；两药联用Annexin V阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别,但死亡细胞明显增加；两药联用HCT116细胞的形态发生改变,巨核多核细胞较单独用药组增多约10％.结论:L-OHP与UCN-01联用对HCT116细胞的增殖具有协同抑制作用,诱导细胞发生凋亡和丝裂灾变.
关键词： 奥沙利铂 7-羟基星形孢菌素 增殖抑制 结肠癌细胞HCT116 -
DNA依赖蛋白激酶催化亚基抑制剂NU7026对结肠癌HCT116癌干细胞的放射增敏作用
目的 以结肠癌细胞HCT116为研究对象,评价DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)抑制剂NU7026对癌干细胞的放射增敏作用及其机制.方法 以CD133 +/CD44+为标志物,流式细胞术检测癌干细胞亚群.将HCT116细胞分为对照组、单纯药物(20 μmol/L NU7026)组、单纯照射(2Gyγ射线)组和药物+照射(20 μmol/L NU7026联合2Gyγ射线)组,照射前2h加入NU7026.细胞集落形成实验检测HCT116细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,γ-H2AX foci的免疫荧光激光共聚焦分析DNA双链断裂损伤修复.结果 体外培养HCT116细胞中CD133+/CD44+癌干细胞亚群比例高达(88.14±0.47)％,HCT116细胞低密度接种无血清培养基中集落形成率为(84.75 ±1.35)％.与单纯照射组比较,药物+照射组细胞存活率显著降低(t=7.22,P＜0.01).受照后48 h,药物+照射组的癌干细胞亚群比例较单纯照射组显著降低(t=9.55,P＜0.01).受照后24 h,NU7026明显增加G2/M期阻滞(t=7.67,P＜0.01),48 h细胞早期凋亡发生率也明显增加(t=8.24,P＜0.05).药物+照射组在照后2、4、8和24 h DNA双链断裂(γ-H2AX foci)残留比单纯照射组明显增多(t=19.58、11.95、7.01和9.45,P＜0.01).结论 NU7026对癌干细胞为优势亚群的结肠癌HCT116细胞具有明显的放射增敏作用,显著增加对癌干细胞的杀伤效应,增敏机制包括抑制DNA修复,诱发不可逆G2/M期阻滞和增加细胞凋亡.
关键词： DNA依赖蛋白激酶催化亚基 结肠癌细胞HCT116 放射增敏 癌干细胞
