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补骨脂素对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路调控机制探讨
目的:探讨补骨脂素对A375细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响及作用机制.方法:以密度2×105个/孔的细胞数接种于6孔板中,将细胞分为空白组、雌二醇组、补骨脂素组、补骨脂素+雌激素受体(ER)阻断剂组(ICI182780)(浓度分别为1×10-3,1,1 μmol· L-1).采用NaOH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性;蛋白免疫印迹法(Westernblot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定ER/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白含量及相应mRNA表达.结果:与空白组比较,补骨脂素组对A375细胞中的黑素合成及TYR活性具有显著抑制作用(P＜0.01),对A375细胞中雌激素受体β(ERβ)蛋白的表达具有明显的抑制作用(P＜0.05),对p38 MAPK,ERK2,JNK的蛋白表达极显著的抑制作用(P＜0.01),对MITF,TYR,TRP-1,TRP-2的蛋白表达极显著的抑制作用(P＜0.01),对ERK2,p38 MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达显著被抑制(P＜0.01);与补骨脂素组比较,ICI182780能够逆转ERβ,ERK,MITF,TYR,TRP-1的蛋白表达(P＜0.01)及p38MAPK,JNK,TRP-2的蛋白表达(P＜0.05),同时能显著阻断补骨脂素对ERK2,p38MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达作用(P＜0.01).结论:补骨脂素通过ER/MAPK信号通路下调MITF和TYR,TRP-1,TRP-2的表达量,从而减少黑素合成.
