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蝎毒多肽提取物对白血病细胞株K562/A02荷瘤鼠耐药性的影响
目的 探讨蝎毒多肽(peptide extract from scorpion venom,PESV)逆转白血病干细胞(leukemiastem cells,LSC)在体内多药耐药(multidrug resistance,MDR)的分子机制.方法 以多药耐药的K562/A02细胞株成模白血病BALB/c裸鼠为例,成模鼠随机分为6组:模型对照组、阿霉素(ADM)组、PESV组、ADM+PESV(H)组、ADM+PESV(M)组、ADM+PESV(L)组.模型对照组给予等体积0.9％氯化钠溶液腹腔注射,其余各组予相应剂量ADM和(或)PESV腹腔注射,连续给药14天.第21天观察各组裸鼠移植瘤生长情况,分别检测瘤块中LSC:细胞膜上P-gp的表达,细胞质中ALDH、PI3K的变化及细胞核中MDR1、NF-κB的活性.结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率和IC50值分别为31.5％、(60.33±10.68)μg/ml和92.8％、(58.33±9.72)μg/ml,分选后细胞干性显著提高,而耐药性无差异性损失;各组造模裸鼠成瘤率100％.瘤体中LSC:流式细胞仪检测细胞膜上P-gp表达结果:检测对照组89.8％、ADM组91.9％、PESV组88.4％、ADM+PESV(H)组53.9％、ADM+PESV(M)组78.0％、ADM+PESV(L)组78.7％;半定量RT-PCR检测MDRl mRNA的表达:PESV组＞ADM+PESV(L)组＞ ADM+PESV(M)组＞ADM+PESV(H)组＞ADM组;免疫组织化学检测ALDH,显示灰度值ADM组＞PESV组＞ADM+PESV(H)组＞ADM+PESV(M)组＞ADM+PESV(L)组;Western blot检测PI3K分子与Elisa检测NF-κB因子结果一致,在ADM组、PESV组表达上调,在ADM+PESV组中表达下调,下调强度与PESV剂量呈正相关.结论 PESV具有下调白血病干细胞膜上P-gp,细胞质内ALDH、PI3K及细胞核中MDR1、NF-κB的表达水平,增强了白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,逆转其多药耐药特性.
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蝎毒多肽有效组分对辐射后M-NFS-60细胞的促增殖作用
目的:观察蝎毒多肽(SVP)及IL-3对M-CSF依赖细胞株M-NFS-60促增殖作用以及对辐射后M-NFS-60细胞增殖的影响.方法:采用AlamarBlue摄入法检测细胞的增殖情况.①选择10个细胞浓度,分别于0 h、2 h、4 h、5.5 h和20 h,检测细胞的增殖情况,确定M-NFS-60细胞对AlamarBlue反应所需的佳细胞密度和孵育时间;②采用佳细胞密度和孵育时间,观察10个SVP组分促进M-NFS-60细胞的增殖作用,筛选出SVP的有效组分;③M-NFS-60细胞经60Coγ-射线照射后分别给予生理盐水、SVP、IL-3、SVP+IL-3处理48 h,测定细胞增殖情况.结果: ①M-NFS-60细胞的接种密度为5×104cells/mL时,对AlamarBlue的还原能力强,孵育时间8 h后,M-NFS-60细胞对AlamarBlue的还原率开始增强,72 h达高;②从10个SVP组分中筛选出II3、IV能明显促进M-NFS-60细胞的增殖;③SVPII3、III3、IV 或IL-3处理辐射后的细胞48 h,细胞的增殖率(﹪)分别为121.58±2.62(II3)、123.39±4.45(III3)、123.51±5.04(IV)、140.12±1.68(IL-3),与空白对照组(100.00±0.01)相比差异有显著性(P<0.01);II3、III3、IV分别与IL-3联用处理细胞48 h后的增殖率分别为163.98±9.20(II3+IL3)、159.89±8.31(IV+IL3)、148.92±9.74(III3+IL3),与SVP处理组比较差异有显著性(P<0.05).结论:蝎毒中存在促进M-NFS-60增殖的有效多肽组分,这些多肽组分能明显促进辐射后M-NFS-60细胞的增殖,并与IL-3对辐射后M-NFS-60细胞的增殖具有协同作用.
