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解毒祛瘀滋阴方和醋酸泼尼松治疗对MRL/lpr狼疮小鼠肠道微生态影响的比较
目的:比较解毒祛瘀滋阴方和醋酸泼尼松对MRL/lpr狼疮小鼠的肠道菌群影响,阐述中医药的优势.方法:运用Illumina MiSeq高通量测序技术分析狼疮模型小鼠、醋酸泼尼松治疗的狼疮小鼠和解毒祛瘀滋阴方治疗的狼疮小鼠的肠道菌群结构,利用LEfSe分析挖掘组间差异微生物.结果:与MRL/lpr狼疮小鼠比较,醋酸泼尼松治疗能上调Prevotella等致病菌丰度,但解毒祛瘀滋阴方治疗却下调其丰度.解毒祛瘀滋阴方治疗后的狼疮小鼠,肠道菌群多样性显著上调,Odoribacter和Ruminococcus等有益菌丰度上调.结论:相比于醋酸泼尼松,解毒祛瘀滋阴方更利于MRL/lpr狼疮小鼠肠道菌群的改善.
关键词： MRL/lpr狼疮小鼠 解毒祛瘀滋阴方 醋酸泼尼松 肠道菌群 -
解毒祛瘀滋阴方治疗系统性红斑狼疮小鼠的代谢组学研究
目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠(MRL/lpr)经解毒祛瘀滋阴方治疗后的代谢组学差异,以探讨解毒祛瘀滋阴方治疗SLE的作用机制.方法:收集醋酸泼尼松治疗组、解毒祛瘀滋阴方治疗组、SLE模型组和昆明种C57BU6J对照组小鼠的尿液样本,应用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用系统(HPLC-Q-TOF/MS),对尿液样本进行代谢图谱分析.应用Mass Hunter和MPP软件处理数据,数据模式识别采用有监督的偏小二乘法-判别分析(PLS-DA).结果:代谢组学分析发现SLE模型小鼠存在较明显的氨基酸代谢紊乱,从尿液样本中鉴别出9种有重要影响的代谢标志物.醋酸泼尼松可以部分修复SLE模型小鼠失衡的苯丙氨酸代谢通路,而解毒祛瘀滋阴方能多维修复失衡的甘氨酸、苯丙氨酸和色氨酸代谢通路.结论:解毒祛瘀滋阴方通过多维修复失衡的氨基酸代谢通路对SLE模型小鼠发挥治疗作用.
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基于CaMK4水平探讨解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠Th17/Treg平衡机制的影响
目的:考察解毒祛瘀滋阴方通过钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶-4(CaMK4)来调控Th17/Treg细胞免疫平衡的作用机制.方法:将40只8周龄雌性MRL/lpr小鼠随机分为模型组、解毒祛瘀滋阴方组(中药组)、CaMK4抑制组(KN-93组)以及醋酸泼尼松组(西药组),另选10只8周龄雌性C57BL/6J小鼠作为对照组.连续给药10周,进行尿蛋白含量测定;剥取小鼠淋巴结和肾脏,计算脏器指数;HE染色观察小鼠肾脏组织病理学变化情况;检测小鼠血清中NO浓度;RT-PCR以及Western blot检测脾脏T细胞中CaMK4的表达水平;流式细胞术检测Th17细胞和Treg细胞的百分率以及两者的比例.结果:解毒祛瘀滋阴方能有效缓解MRL/lpr小鼠淋巴结、脾脏肿大(P＜0.01),显著降低尿蛋白以及血清NO浓度(P＜0.01,P＜0.05),改善淋巴结和肾脏病理状态.并且,中药组小鼠脾脏T细胞中CaMK4 mRNA及蛋白表达水平与模型组比较,显著降低(P＜0.05,P＜0.01),脾脏中Th17细胞显著下调(P＜0.01),Treg细胞显著上调(P＜0.01).结论:解毒祛瘀滋阴方能够降低MRL/lpr小鼠脾脏T细胞中CaMK4的表达水平,促使Th17/Treg细胞比值趋向于正常水平,提示解毒祛瘀滋阴方通过CaMK4信号通路调控Th 17/Treg细胞的免疫平衡可能是其治疗系统性红斑狼疮作用机制之一.
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解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮小鼠肠道菌群的调节作用
目的:研究解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠肠道菌群的调节机制.方法:30只SPF级8周龄MRL/lpr雌性小鼠随机分为模型组、醋酸泼尼松(西药)组和解毒祛瘀滋阴方(中药)组,每组10只;另设10只SPF级8周龄C57BL/6J雌性小鼠为正常组.收集各组小鼠粪便样本,提取细菌基因组DNA,用荧光定量PCR定量分析大肠杆菌、肠球菌属、双歧杆菌属、乳酸杆菌属以及拟杆菌属细菌的含量;收集各组小鼠尿液样本进行尿蛋白测定;HE染色观察各组小鼠肾脏组织病理变化.结果:模型组与正常组相比,尿蛋白定量、5种细菌含量均有显著性差异(P＜0.01);与模型组相比,西药组和中药组小鼠治疗后24h蛋白尿含量均有所下降(P＜0.01),肾脏病理损伤情况也都有所缓解,但西药组小鼠肠道菌群仍然处于失调状态,而中药组小鼠体内5种肠道菌群数量均有显著性变化(P＜0.01).结论:SLE模型小鼠存在较明显的肠道菌群失调,采用解毒祛瘀滋阴方治疗后SLE小鼠体内肠道菌群失衡状态得以修复,趋向于正常组水平,这可能是其治疗SLE作用机制之一.
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基于HPLC-Q-TOF/MS的代谢组学方法用于解毒祛瘀滋阴方对系统性红斑狼疮干预作用的研究
该文建立了基于高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(HPLC-Q-TOF/MS)的代谢组学方法,研究系统性红斑狼疮(SLE)小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后血清代谢物的变化,探讨SLE发病及药物作用机制.利用正交偏小二乘法(or-thogonal partial least squares,OPLS)对实验数据进行模式识别,发现对照组、SLE模型组、解毒祛瘀滋阴方治疗组和醋酸泼尼松治疗组的代谢图谱存在较明显的差异.根据OPLS载荷图,利用精确质量数结合二级质谱鉴定出traumatic acid,PAF,12(S)-HETE,15 (S)-HETrE,Hepoxilin B3等12种差异代谢物.SLE小鼠经解毒祛瘀滋阴方治疗后,有效调节PAF,12 (S)-HETE等差异代谢物的相对含量接近于对照组水平.代谢通路分析表明,SLE发病会导致体内不饱和脂肪酸和氨基酸代谢通路显著变化,而解毒祛瘀滋阴方对SLE紊乱的不饱和脂肪酸代谢通路具有一定修复调节作用.
关键词： 代谢组学 系统性红斑狼疮 解毒祛瘀滋阴方 HPLC-Q-TOF/MS OPLS -
解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮小鼠CD4+T细胞MeCP2信号通路的影响
目的 探讨解毒祛瘀滋阴方治疗系统性红斑狼疮的可能作用机制.方法 30只MRL/lpr狼疮小鼠随机分成中药组、西药组、模型组各10只,10只C57 BL/6小鼠作为对照组.中药组予0.5g/ml浓度的解毒祛瘀滋阴方水煎剂灌胃,西药组予0.5 mg/ml浓度的醋酸泼尼松片混悬液灌胃,模型组和对照组予蒸馏水灌胃,均每次0.01 ml/g,每日1次,连续干预12周.干预结束后观察小鼠皮毛、活动及浅表淋巴结等一般状态,检测小鼠血清白细胞介素4 (IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平变化;HE染色染色观察肾脏病理改变;检测小鼠脾脏CD4+T细胞甲基结合蛋白2(MeCP2) mRNA和蛋白的表达水平. 结果 与模型组比较,中药组小鼠肾脏病理损伤明显改善,血清IL-4、IFN-γ浓度水平降低,MeCP2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P ＜0.05或P＜0.01),且中药组MeCP2蛋白及mRNA表达水平升高较西药组明显(P＜0.05或P＜0.01).结论 解毒祛瘀滋阴方可能是通过激活MeCP2信号通路,进而抑制系统性红斑狼疮的发病.
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解毒祛瘀滋阴方冻干粉和含药血清对小鼠单核巨噬细胞的影响
目的 探讨解毒祛瘀滋阴方冻干粉与含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症信号通路的影响.方法 体外培养RAW264.7细胞,随机分为对照组、LPS组、解毒祛瘀滋阴方含药血清组、冻干粉组、LPS加含药血清组及LPS加冻干粉组.干预24 h后,采用CCK-8法筛选含药血清和冻干粉的佳浓度并检测二者对细胞活力的影响;采用ELISA法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用qRT-PCR法检测核转录因子-κB (NF-κB)、TNF-αmRNA的表达;采用Western blotting法检测NF-κB蛋白表达水平;采用LC-MS检测解毒祛瘀滋阴方含药血清中的有效成分.结果 与对照组比较,LPS刺激组TNF-αt炎性因子水平、NF-κB、TNF-a mRNA表达水平和NF-κB蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),含药血清组TNF-α炎性因子水平、NF-κB、TNF-α mRNA表达水平和NF-κB蛋白表达水平较冻干粉组降低明显(P＜0.05);与LPS组比较,LPS加含药血清组TNF-α炎性因子水平、NF-κB、TNF-α mRNA表达水平和NF-κB蛋白表达水平降低较LPS加冻干粉组明显(P＜0.05);解毒祛瘀滋阴方含药血清中检测到芍药苷和阿魏酸.结论 解毒祛瘀滋阴方冻干粉和含药血清均具有抑制炎症信号通路的作用.
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解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠神经精神症状的保护作用
目的 神经精神性狼疮(neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,NPSLE)是系统性红斑狼疮致残和致死的临床表现之一.本研究拟利用MRL/lpr狼疮小鼠模型研究解毒祛瘀滋阴方对NPSLE的治疗作用.方法 采用旷场和强迫游泳行为学实验测定动物NPSLE相关症状,ELISA法测定动物大脑皮层自身抗体滴度,组织免疫荧光染色测定小鼠大脑皮层IgG表达沉积情况.结果 研究发现解毒祛瘀滋阴方可以明显缓解MRL/lpr小鼠的抑郁和抗焦虑样行为,降低脑内抗心磷脂抗体以及抗N-甲基-D-天冬氨酸受体抗体滴度,并减少脑内IgG表达沉积.结论 本研究表明解毒祛瘀滋阴方可以缓解MRL/lpr狼疮小鼠的神经精神症状和改善大脑皮层病理学改变,提示解毒祛瘀滋阴方是NPSLE的潜在治疗方法.
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解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4+T细胞DNA甲基化敏感基因表达的影响
目的:观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4+T细胞DNA甲基化敏感基因白介素10(IL-10)、蛋白磷酸酶2Ac(protein phosphatase 2Ac,PP2Ac)、CD70表达水平的影响.方法:40只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为对照组和解毒祛瘀滋阴方中药组,分别予解毒祛瘀滋阴方中药和生理盐水灌胃8周.干预结束后,观察小鼠皮损及血清抗dsDNA抗体、C3浓度、尿蛋白水平变化;HE染色及荧光染色后观察肾脏病理改变;荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4+T细胞甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10 mRNA表达水平.结果:与对照组比较,中药组小鼠血清抗dsDNA抗体、C3浓度和肾脏病理损伤明显改善,CD70、PP2Ac和IL-10的mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).结论:解毒祛瘀滋阴方具有对MRL/lpr狼疮鼠的治疗作用,其作用机制可能与其抑制下游甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10的过度表达有关.
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解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞DNA甲基化的影响及与GRα表达的相关性研究
[目的]探讨解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响及与糖皮质激素受体α（GRα)之间的关系。[方法]将24只6周龄SPF级MRL/lpr狼疮小鼠随机平均分为对照组和中药组。免疫磁珠技术分离出脾脏CD4+T细胞，采用MethyflashTM总体DNA甲基化试剂盒检测CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平，实时定量PCR技术检测GRα、DNA甲基化转移酶1（DNMT1）、生长停滞与DNA损伤诱导蛋白α（Gadd45α）mRNA表达水平。[结果]同对照组比较，中药组MRL/Lpr小鼠CD4+T细胞基因组DNA整体甲基化水平明显升高（P<0.05），DNMT1基因mRNA表达明显上升（P<0.05），Gadd45α基因mRNA表达明显下降（P<0.05），GRα基因mRNA表达明显升高（P<0.05）。[结论]解毒祛瘀滋阴方可以升高MRL/lpr狼疮小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平，同时可以上调GRαmRNA表达，但二者之间没有直接联系。解毒祛瘀滋阴方可能是通过其他效应基因实现DNA甲基化调控作用，而不是通过GRα基因。
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解毒祛瘀滋阴方对强的松治疗的MRL/lpr狼疮鼠肺、脾、腹腔巨噬细胞TLR4信号通路的影响
[目的]观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠巨噬细胞TLR4信号通路的影响.[方法]MRL/lpr狼疮鼠分为模型组、强的松组、解毒祛瘀滋阴方组(以下简称:中药组)以及强的松加中药组(以下简称:中西药结合组),分别以生理盐水、强的松、解毒祛瘀滋阴方中药和强的松加解毒祛瘀滋阴方中药灌胃4周,收集肺、腹腔、脾脏巨噬细胞,RT-PCR检测相关基因的表达.[结果]经强的松治疗后狼疮鼠肺巨噬细胞TLR4 mRNA和脾巨噬细胞TLR4蛋白都显著升高(P<0.05),而中西药结合组则可以显著降低升高的脾巨噬细胞TLR4蛋白水平(P<0.05).强的松还可以显著降低肺、腹腔巨噬细胞MyD88、IFN-α、iNOS mRNA等TLR4下游分子的表达(P<0.05),而中西药结合组可以显著升高已经降低的肺巨噬细胞MyD88 mRNA的表达(P<0.05).[结论]MRL/lpr狼疮鼠应用糖皮质激素后,巨噬细胞TLR4信号通路发生改变,解毒祛瘀滋阴方中药可以降低糖皮质激素造成的TLR4蛋白的异常表达.
