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补肾活血方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用
目的:观察补肾活血方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法:采用GSK-3 β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,然后提取和检测胞核蛋白β-catenin的表达,确定激活正常人滑膜细胞的Wnt/β-catenin信号通路的佳时间点,然后给予补肾活血方含药血清干预,采用Western Blot检测人滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因MMP-7和Cyclin D1的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测滑膜细胞上清液中MMP-7和Cyclin D1的表达.结果:Western Blot结果显示:成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,与正常组比较,SB-216763干预组的人滑膜细胞核蛋白β-catenin、MMP-7和Cyclin D1的表达明显升高(P＜0.05);补肾活血方含药血清干预后,滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因MMP-7和Cyclin D1有显著下调(P＜0.05).ELISA结果显示:与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-7和Cyclin D1的表达明显升高(P＜0.05).而补肾活血方干预后较SB-216763干预组明显下调(P＜0.05).结论:补肾活血方具有调控人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的作用,其结果有助于从单一通路阐释补肾活血法中药治疗膝骨关节炎的作用机制.
关键词： 补肾活血方 人滑膜细胞 Wnt/β-catenin信号通路 实验研究 -
人颞下颌关节B型滑膜细胞体外三维培养的研究
骨关节病中,滑膜的病变影响软骨的代谢,单纯针对软骨的治疗效果不佳.本研究利用明胶海绵材料做支架,体外三维立体培养人滑膜细胞,为移植滑膜治疗颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)病晚期病变进行尝试.
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氢化可的松抑制人中性粒细胞与滑膜细胞粘附机理研究
目的研究氢化可的松对正常人中性粒细胞(PMN)与滑膜细胞(HSC)粘附的作用及其机理.方法 MTT比色法检测PMN与HSC的粘附,Cell-ELISA和RT-PCR法检测HSC粘附分子的表达,EMSA研究核转录因子NF-κB的活化.结果氢化可的松可显著抑制50 U*mL-1 rhTNF-α与IL-1β刺激的HSC与PMN的粘附;显著抑制HSC表面VCAM-1的表达及VCAM-1 mRNA表达,但对ICAM-1 mRNA的表达无显著影响;同时对TNF-α诱导的NF-κB活化有显著抑制作用.结论氢化可的松显著抑制PMN与HSC的粘附,其作用机理可能是通过抑制NF-κB的活化,进而抑制滑膜细胞中VCAM-1 mRNA及蛋白表达而实现的.
关键词： 氢化可的松 人滑膜细胞 中性粒细胞 粘附 核因子κB(NF-κB) -
美洛昔康抑制正常人中性粒细胞与滑膜细胞粘附的作用机理研究(英文)
目的研究美洛昔康对正常人中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)与滑膜细胞(human synovial cell,HSC)粘附的抑制作用及其作用机理.方法用MTT比色法检测PMN与HSC的粘附,分别用Cell-ELISA和RT-PCR法检测粘附分子ICAM-1和VCAM-1的蛋白及基因表达,用EMSA法检测NF-κB的活性.结果美洛昔康可显著的并以剂量依赖的方式抑制TNF-α(50 u·mL-1)和IL-1β(50 u·mL-1)作用12 h诱导的PMN与HSC粘附,其IC50分别为3.38×10-7和3.56×10-6 mol·L-1.进一步研究发现美洛昔康在1×10-6～1×10-5 mol·L-1时还可在蛋白水平及mRNA水平抑制TNF-α(50 u·mL-1)诱导的HSC细胞ICAM-1的表达,但对VCAM-1蛋白及mRNA表达均未见显著影响;同时美洛昔康还可显著抑制50 u·mL-1 TNF-α诱导的NF-κB的活化.结论美洛昔康抑制NF-κB的活化,进而抑制ICAM-1的表达可能是其抑制PMN与HSC粘附的机制之一.
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人滑膜细胞的分离培养与鉴定
[目的]建立人滑膜细胞体外分离培养的方法,为进一步的实验研究奠定基础.[方法]分别用胶原酶消化法及组织块培养法分离和培养人滑膜细胞,并通过形态学和免疫组化进行鉴定.[结果]培养的滑膜细胞具有成纤维细胞的形态和特征;免疫组化染色显示Vimentin阳性,CD68阴性,滑膜细胞呈长梭形极向生长.[结论]两种方法均成功的培养出了人滑膜细胞,适合做为实验研究的靶细胞.
