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花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响
目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响.方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检测大鼠骨骼肌中Cox4i1、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因mRNA表达水平;BSP法检测Cox4i1基因DNA甲基化状态;Western blot法检测骨骼肌中TET3和DNMT3A蛋白表达情况.结果:模型组COX4I1蛋白量和mRNA水平均比空白组显著增加(P＜0.01);花椒低、高剂量组能显著降低模型组大鼠Cox4i1 mRNA水平(P＜0.01,P＜0.05).模型组Cox4i1甲基化频率有降低趋势,且接近显著水平;花椒低剂量组能显著增加Cox4i1甲基化频率(P＜0.05).模型组Dnmt1、Tet1、Tet2 mRNA水平显著增加(P＜0.05);花椒低剂量组能显著降低Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt1、Tet1、Tet2和Tet3 mRNA水平(P＜0.05,P＜0.01);花椒高剂量组能显著降低Dnmt3b、Tet3、Tet2 mRNA水平(P＜0.05,P＜0.01).花椒高、低剂量组对于DNMT3A和TET3蛋白表达量均未有显著影响.结论:低剂量花椒可能通过同时降低DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达水平,而发挥甲基化的作用,使Cox4i1 DNA甲基化频率增加,从而使mRNA水平降低.
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女贞子对正常大鼠肝脏COX活性的影响及其DNA甲基化调节机制的初步研究
探讨女贞子对大鼠肝脏细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)活性的影响及可能的DNA甲基化机制.实验采用女贞子的水提物按2.0 g·kg-1和6.0 g·kg-1灌胃大鼠30 d,处死大鼠后,取肝脏测定COX活性、COX的亚基之一COX4I1蛋白浓度、测定Cox4i1,Dnmt3a,Tet1基因mRNA表达水平、TET1和DNMT3A的蛋白水平以及检测Cox4i1DNA甲基化频率.结果显示女贞子低剂量和高剂量能显著性升高COX的活性和COX4I1的浓度(P<0.05);有降低TET1蛋白和DNMT3A的蛋白表达量的趋势;但未显著改变Cox4i1,Dnmt3a,Tet1基因mRNA表达.与空白对照组相比,女贞子高剂量组甲基化频率有降低的趋势但未达到显著水平.该研究表明:女贞子对大鼠肝脏的COX酶活性有促进作用,其可能通过促进COX4I1的蛋白量增加实现;女贞子对DNMT3A的蛋白表达有降低趋势,其可能是Cox4i1DNA甲基化频率有降低趋势的原因.女贞子对于DNMT3A和TET1的蛋白表达可能有同向调节作用,具体机制仍不明确.
