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针刺对快速老化模型鼠脑中衰老相关基因表达的调整作用
目的:探讨针刺调整作用在分子水平的反映.方法:以快速老化模型鼠(SAM)脑中衰老相关基因的表达为研究对象,应用由磁珠分离法纯化mRNA,SMA RT-PCR cDNA合成和AFLP-银染法结合形成的mRNA-AFLP分析技术,进行mRNA指纹检测,寻找衰老相关性差异表达的基因片段,并观察针刺对其表达水平的影响.结果:随机应用20对引物作选择性AFLP扩增,共发现42条带型较为清晰的SAM P、R两系组间差异表达带,其中,33条(约占78.6%)在P系相对于R系低表达,9条(约占21.4%)在P系相对于R系高表达.针刺SAMP10的不同腧穴,可使异常低表达的基因表达水平不同程度地上调,使异常高表达的基因表达水平不同程度地下调,其变化均趋同于正常老化的SAMR1.结论:针刺对衰老机体紊乱的分子网络能发挥整体调节作用,促使其恢复协调平衡,从而延缓衰老进程.
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老年人睾丸组织退化的基因表达谱研究
目的:研究老年人睾丸组织基因表达谱变化,为研究老年人睾丸功能衰退机制奠定基础.方法:知情同意下获取正常青年人和老年人睾丸组织标本各3例,采用QIAGEN RNA提取试剂盒提取总RNA,分别等量混合后制备探针.利用ClonTech公司生产的包含8 000个已知基因的人类cDNA基因芯片[Atlas Plastic Human 8K Microarray (Cat.#7905-1)]筛选差异表达基因.按基因功能分类方法对老年睾丸组织中差异表达的基因进行归类分析.用RT-PCR、T-A克隆测序等方法选择目的基因,验证基因芯片结果.结果:筛选到差异表达基因117个(1.46%),83个基因在老年睾丸组织中表达下调,34个基因表达上调.在表达下调的基因中,代谢相关基因16个(19.3%),与基因和蛋白表达相关的基因18个(21.7% ),信号通路相关基因16个( 19.3% ),细胞分化相关基因19个(22.9%),细胞结构和运动相关基因6个(7.2%),细胞或内环境稳态相关基因4个(4.8%),未知功能基因4个(4.8%).在表达上调的基因中,代谢相关基因3个(8.8%),与基因和蛋白表达相关的基因10个(29.4% ),信号通路相关基因2个(5.9%),细胞分化相关基因11个(32.4%),细胞结构和运动相关基因8个(23.5%).RT-PCR及T-A克隆测序进一步证实呼吸链相关的基因cox7a2在老年睾丸组织显著上调,atp50显著下调.结论:老年人的睾丸组织中基因表达谱发生了明显变化,老年人睾丸功能衰退与多种基因表达变化有关,其中呼吸链功能相关cox7a2、atp50基因的显著差异表达可作为重要目的基因,可能对进一步研究睾丸功能衰退的机制具有重要意义.
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人衰老相关DNA片段的筛选及特征分析
目的:探索衰老相关新基因.方法:采用RAPD法筛选衰老相关的DNA片段,采用Southern blot 分析基因状态,Northern blot 分析mRNA水平.结果:筛选出衰老特异的DNA片段,长894 bp,命名为sad.将sad片段克隆、测序,查询GenBank,确认为一种新的衰老相关序列,基因登录号为AQ324104.Southern blot分析表明,sad基因可能是一种单拷贝基因;sad在衰老2BS细胞中的Southern blot图谱不同于年轻细胞,而与人胃癌细胞系BGC-823类似.Northern blot分析显示,sad基因具有表达活性,其RNA长约0.5 kb,相对水平在各代龄的细胞间差异无显著性.结论:sad是一种新的与衰老相关的DNA片段,sad基因可能为单拷贝基因,具有表达活性.
