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电针减轻大鼠心肌缺血损伤的AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联机制
目的:通过检测心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPK α)、组蛋白去乙酰化酶5(HDAC5)、缺氧诱导因子(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达变化,探讨电针减轻心肌缺血(Myocardial ischema,MI)损伤的AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联机制.方法:将36只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组(n=6)、假手术电针组(n=6)、模型组(n=12)、模针组(n=12),模型组和模针组结扎冠状动脉左前降支制作MI模型;假手术组和假手术电针组开胸后暴露心脏,但不结扎.假手术电针组和模针组于手术后第2天电针双侧"内关"穴,疏密波,2Hz/15Hz,强度1.5～2mA,持续30min,每日1次,连续治疗4d;假手术组和模型组不予电针干预,但采用同样的方法抓取、固定.采用TTC染色观察大鼠心肌梗死面积,放射免疫法检测血清肌钙蛋白T(cTnT)表达变化,实时定量PCR检测VEGF mRNA表达,蛋白质免疫印迹法检测心肌组织中AMPKα、HDAC5、HIF-1α及VEGF蛋白表达.结果:模型组大鼠心肌缺血4d后,梗死面积明显,且与假手术组比较,血清cTnT表达水平上升(P＜0.01),心肌组织中VEGF mRNA表达下降(P＜0.05), HIF-1α蛋白表达增加(P＜0.01),而AMPK α、HDAC5、VEGF蛋白表达变化不明显(均P＞0.05);与模型组比较,电针治疗4d后,模针组心肌梗死面积减少(P＜0.01),血清cTnT表达下降(P＜0.01),心肌组织中VEGF mRNA及蛋白和AMPKα、HDAC5、HIF-1α蛋白表达均上升(P＜0.05,P＜0.01).结论:电针可能通过活化心肌组织中AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联,促进VEGF表达介导血管新生,减少心肌梗死组织面积,实现心肌保护效应.
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组蛋白去乙酰化酶5在脑胶质瘤中的表达及临床分析
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶5在脑胶质瘤中的表达及临床分析.方法 收集2012年1月～2015年12月确诊为脑胶质瘤并进行手术治疗留有蜡块标本的患者100例,按照WHO分型Ⅰ～Ⅳ级分为两组,Ⅰ～Ⅱ级属于低级别组,Ⅲ～Ⅳ属于高级别组,每组各50例.采用免疫组织化学法检测HDAC5在脑胶质瘤中的表达和分布.结果 低级别组2例死亡,生存率96.0％,高级别组死亡18例,生存率64.0％,明显低于低级别组,差异有统计学意义(χ2=16.324,P<0.05).高级别组HDAC5表达阳性率显著高于低级别组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HDAC5蛋白在脑胶质瘤细胞中的表达与胶质瘤的病理级别、肿瘤分化及患者生存周期可能具有相关性.
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甲状腺激素促进肿瘤细胞增殖及血管新生信号通路的研究
目的 探讨甲状腺激素促进肿瘤细胞增殖及血管新生的信号通路.方法 体外培养人胶质母细胞瘤细胞系(SNB19),给予甲状腺激素(主要为T4,100 nmol/L)、四碘甲腺乙酸(tetraiodothyroacetic acid,Tetrac,100 nmol/L)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂(2.5 μmol/L)作用后,采用Western印迹方法检测磷酸化蛋白激酶D1(PKD1)、磷酸化组蛋白去乙酰化酶(HDAC)5、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达,ELISA方法检测细胞培养上清血管内皮生长因子(VEGF)的表达量,3-(4,5)-2-唑噻-(2,5)-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖.结果 与对照组相比,T4干预组磷酸化PKD1、磷酸化HDAC5、磷酸化ERK1/2水平均增加(P均＜0.05),Tetrac干预组及PKC抑制剂干预组磷酸化PKD1、磷酸化HDAC5、磷酸化ERK1/2水平均降低(P均＜0.05).ELISA结果显示,与对照组相比,T4干预组VEGF浓度升高[(56.763±2.611) ng/L vs.(36.597±0.933) ng/L,P＜0.05],Tetrac+T4干预组VEGF浓度降低[(22.215±1.531) ng/L vs.(36.597±0.933) ng/L,P＜0.05].MTT结果显示,与对照组相比,T4干预组OD值较高[(0.333±0.020)vs.(0.243±0.006),P＜0.05],Tetrac干预组OD值较低[(0.060±0.016) vs.(0.243±0.006),P＜0.05].结论 甲状腺激素通过结合整合素αvβ3,激活ERK1/2信号通路促进肿瘤细胞增殖,激活PKC/PKD1/HDAC5信号通路促进血管新生.
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组蛋白去乙酰化酶5在非小细胞肺癌迁移中的作用研究
背景与目的:组蛋白乙酰化状态受组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)和组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferases,HATs)调节,进而调控基因转录.HDACs和HATs失衡是肿瘤发生发展的重要分子机制.组蛋白去乙酰化酶5(histone deacetylase 5,HDAC5)在多数肿瘤中表达降低,然而其在非小细胞肺癌细胞迁移中的作用尚未见报道.本研究旨在检测HDAC5基因在非小细胞肺癌中的差异性表达,研究HDAC5基因过表达对肺腺痛NCI-H1299细胞迁移的影响.方法:采用real time RT-PCR、Western blot检测28例非小细胞肺癌手术标本中HDAC5 mRNA和蛋白表达;将野生型HDAC5(HDAC5wt)基因转染到NCI-H1299细胞中,将细胞分为转染HDAC5wt基因的实验组(HDAC5wt)、未转染任何质粒的正常对照组(control)、转染空质粒的阴性对照组(vector).通过MTT方法比较3组细胞的生长情况;利用划痕、Transwell方法检测HDAC5基因过表达对细胞迁移能力的影响.结果:对照组相比,约71.4%(20/28)非小细胞肺癌患者手术标本中HDAC5 mRNA和蛋白表达明显降低;MTT结果显示在第2～5天,实验组D490值显著性低于正常对照组及阴性对照组,而在24 h时,3组细胞增殖差异无统计学意义;Transwell迁移实验结果显示实验组跨膜细胞的数目为158.3±19.4,较正常对照组(247.0±12.1)及阴性对照组(236.0±14.9)均显著减少(P<0.05);划痕实验结果显示HDAC5基因过表达后,H1299细胞划痕愈合程度明显降低.结论:HDAC5基因在非小细胞肺癌中低表达;体外过表达HDAC5基因可抑制NCI-H1299细胞迁移.
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SiRNA-HDAC5对非肥胖型糖尿病鼠组蛋白修饰异常的干预及其治疗作用
目的:通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干预非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)鼠脾CD4+T细胞组蛋白去乙酰化酶5(histone deactylase 5,HDAC5)的表达,检测免疫、炎症及肾功能相关指标,评估siRNA-HDAC5对NOD鼠的治疗作用,探讨HDAC5与糖尿病肾病之间的关系.方法:随机将NOD鼠分为3组,在12周龄时分别于尾静脉注射siRNA-HDAC5,siRNA-Control或生理盐水,于18,24和30周龄取样本检测,以血糖仪检测各组NOD鼠血糖,ELISA检测尿白蛋白排泄率及血清细胞因子IL-1,IL-6,IL-18和TNF-α水平.实时定量PCR检测各组NOD鼠CD4+T细胞CD11a,CCR5以及CX3CR1转录水平,Western印迹检测NOD鼠脾脏CD4+T细胞HDAC5蛋白水平.结果:与未干预对照组相比,HDAC5干预组小鼠血糖和尿白蛋白排泄率均显著降低,血清IL-1,IL-6,IL-18及TNF-α细胞因子水平下降,脾CD4+T细胞CD11a,CCR5以及CX3CR1明显降低.结论:阻断NOD鼠的HDAC5表达能减缓糖尿病鼠肾损伤的发生和发展.
关键词： 组蛋白去乙酰化 组蛋白去乙酰化酶5 细胞因子 尿白蛋白/尿肌酐比率
