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黄芪活性成分QST、QT对CHOnl细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响
目的:观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G-蛋白结合活性的影响.方法:以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性,用[35S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的C-蛋白的结合活性,并计算偶联效率.结果:QST对M1受体密度、[35S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用(P＜0.01),而QT无作用(P＞0.05).结论:QST对M1受体的偶联功能有上调作用.
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FKN影响动脉粥样硬化信号传导机制及G-蛋白在其中作用的研究
目的 探讨鸟苷酸结合蛋白(G-蛋白)对fractalkine(FKN)诱导单个核细胞合成NF-κB、TNF-α的影响及FKN-CX3CR1可能存在的一条信号传导机制,并研究G-蛋白在其中的作用.方法 抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.将每份提取的单个核细胞分为:空白对照组、FKN组及百日咳毒素(PTX)组.应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.结果 (1)FKN诱导组较空白组NF-κB、TNF-α表达明显增多,G-蛋白阻断剂PTX组较FKN组NF-κB、TNF-α表达明显减少.结论 (1)FKN-CX3CR1有促进动脉粥样硬化形成的作用,CX3CR1为G-蛋白偶联受体,FKN与CX3CR1结合以后,可以通过与G-蛋白偶联,启动细胞内信号传导机制.
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铅对胚胎大鼠海马神经元G蛋白mRNA表达的影响
目的研究铅对神经信号传导的关键部位--细胞膜上G蛋白(G-proteins)的mRNA表达水平的影响.方法采用胚胎大鼠海马神经元无血清培养方法,加入不同浓度的氯化铅溶液,设立无铅暴露的空白对照组,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术半定量测定G蛋白三种不同类型α亚基,包括Gs、Gi2和Golα亚基mRNA表达水平,然后对结果进行相关矩阵分析.结果随着铅暴露水平的提高,Gi2α、GolαmRNA表达水平显著增加,而GsαmRNA表达水平却无明显改变.结论铅暴露可干扰海马神经元G蛋白mRNA的表达,使G蛋白不同α亚基的mRNA表达水平失去平衡,从而影响神经信号的正常传递.
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m4AChR-Gilα融合蛋白的建立、表达及几种配体对其机能的影响
目的通过Baculovirus-Sf9细胞系统制备并表达m4AChR-Gilα融合蛋白,检测几种配体对融合蛋白质中m4AChR与Gilα间相互作用,并以该融合蛋白质为工具,筛选m4AChR的特异性配体.方法两步聚合酶链反应建立m4AChR-Gilα融合cDNAs,并在Sf9细胞内表达.通过[3H]QNB和[35S]GTPγS替代结合实验研究几种配体乙酰胆碱、卡巴胆碱、AF-102B、prifinium、AF-DX116和阿托品对m4AChR-Gilα融合蛋白的作用.结果m4AChR-Gilα融合蛋白表达水平为(47.04±1.58)pmol/g蛋白,不同配体使融合蛋白质中Gilα与二磷酸鸟苷的亲和力发生变化.结论杆状病毒表达的m4AChR-Gilα融合蛋白具备m受体配体结合特性和组分间的偶联功能.配体通过改变融合蛋白质中Gilα与二磷酸鸟苷的亲和力,活化该融合蛋白质.
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高度糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞G-蛋白亚基基因表达的影响
目的:研究高度糖基化终产物(AGEs)对G-蛋白亚基基因表达的影响,了解G-蛋白在AGEs介导的胞内信号转导途径中的作用.方法:利用半定量RT-PCR技术分析大鼠主动脉平滑肌细胞受AGEs作用后G-蛋白亚基Goα、GsαmRNA的改变.结果:AGEs在大鼠主动脉平滑肌细胞中上调Gsα的表达,但却使GoαmRNA水平显著下降.结论:G-蛋白或其某些亚基在AGEs介导的胞内信号转导途径和病理过程中可能起一定作用.
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鸟苷酸结合蛋白在失血性休克大鼠心肺组织中的表达
目的研究失血性休克大鼠心肺组织鸟苷酸结合蛋白(G蛋白)的变化.方法颈总动脉放血,使平均动脉压降至45 mm Hg(1 mm Hg=0.133kPa)稳定1 h致大鼠中度失血性休克模型,6 h后用Western blot法测定心肺组织Gsa、Gia、Gqa、Goa的含量.结果休克后心脏膜组织Gsa两条带(84.2±5 8)%;(84.6±4.2)%较对照组(100%)显著降低.Gia(159.4±7.7)%和Gqa(130.4±20.9)%带较对照组(100%)则显著升高,Goa(90.6±4.9)%降低(P＜0.05).肺膜组织Gsa两条带较正常对照组显著降低.Gia和Gqa较正常对照组织也下降(P＜0.05).结论大鼠心肺组织G蛋白的变化可能参予了失血性休克时信号转导系统功能障碍的发生.
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失血性休克大鼠心脏G蛋白变化及纳络酮对它的影响
目的:研究失血致低血容量性休克大鼠心脏组织鸟苷酸结合蛋白(Guanine nucleotide-binding protein,G蛋白)含量的变化及纳络酮对其影响。方法:颈总动脉放血,使平均动脉压降至45 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),稳定1 h,完成失血致低血容量性休克大鼠模型,21只大鼠随机均分为:休克组、纳络酮治疗组、空白对照组。采用Western blot技术测定大鼠休克后6 h心脏组织中Gsα,Giα,Gqα,Goα的含量。结果:休克后心脏膜组织Gsα两条带较对照组显著降低(P<0.05和P<0.01)。Giα和Gqα带较对照组则显著升高(P<0.01和P<0.05),Goα降低(P<0.05)。纳络酮治疗后,Gsα两条带较休克组显著升高(均P<0.01),Giα和Gqα带较休克组显著降低(P<0.05；P<0.01),Goα降低更明显(P<0.01)。结论:大鼠心脏组织G蛋白含量的变化可能参与了失血致低血容量性休克时信号转导系统障碍的发生。纳络酮在改善休克的同时,也改变了G蛋白的水平,提示休克大鼠的心脏收缩舒张功能可能有G蛋白参与。
