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黄芪活性成分QST、QT对CHOnl细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响
目的:观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G-蛋白结合活性的影响.方法:以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性,用[35S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的C-蛋白的结合活性,并计算偶联效率.结果:QST对M1受体密度、[35S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用(P＜0.01),而QT无作用(P＞0.05).结论:QST对M1受体的偶联功能有上调作用.
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影响磁珠共价偶联效率的因素分析
目的 研究不同条件下Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与牛血清白蛋白(BSA)的偶联效率,探讨其影响因素.方法 分别取Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA混合,在不同的pH条件、不同的硫酸铵浓度和不同的BSA浓度下37℃振荡孵育18h,然后置于磁力架上静置2～3 min分离上清液.应用Bradford蛋白定量法对偶联前后的上清液进行蛋白定量分析,计算不同条件下的偶联效率.结果 当缓冲液pH值为9.5时偶联效率为1.12μgBSA/mg磁珠,pH值为7.4时偶联效率为0.41 μg BSA/mg磁珠；当反应体系中硫酸铵终浓度为1.2 mol/L时偶联效率为9.5 μg BSA/mg磁珠,硫酸铵浓度为0.8 mol/L时偶联效率为8μg BSA/mg磁珠；当偶联的BSA终浓度为0.4 mol/L时偶联效率为9.5μg BSA/mg磁珠,BSA浓度为0.6 mol/L时偶联效率为13 μg BSA/mg磁珠.结论 缓冲液pH值、硫酸铵浓度和BSA的浓度会影响Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA的偶联效率,该偶联过程在pH9.5、1.2 mol/L硫酸铵浓度和0.6 mol/L BSA的条件下进行较为适合.
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MRSA-PBP2a单克隆抗体乳胶凝集检测法的建立
[目的]应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法.[方法]以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺(EDC)共价偶联,并对偶联条件(偶联抗体浓度、乳胶浓度、偶联时间和偶联缓冲液)进行探索和优化,建立检测PBP2a的乳胶凝集法.[结果]140 ms/L的抗体浓度与15 g/L的羧化聚苯乙烯乳胶,在pH 5.8缓冲液中偶联8 h后有较好的凝集效果和偶联效率,所建立的乳胶凝集法敏感性和特异性良好.[结论]初步建立了检测PBP2a的胶乳凝集法,为研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础.
