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血竭素高氯酸盐对高糖培养的肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子和纤维连接蛋白的影响
目的:研究血竭素高氯酸盐对高糖环境下肾小管上皮细胞(HKC)产生结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响作用,探讨血竭素高氯酸盐在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾小管间质纤维化中的作用机制.方法:将体外培养的HKC细胞分为正常组(NG组,5.5 mmol·L~(-1)D-葡萄糖)、高糖培养组(HG组,25 mmol·L~(-1)D-葡萄糖),血竭素高氧酸盐+正常组(DNG组,7.5μmol·L~(-1)血竭素高氯酸盐+5.5 mmol·L~(-1)D-葡萄糖)、血竭素高氯酸盐+高糖组(DHG组,7.5μmol·L~(-1)血竭素高氯酸盐+25 mmol·L~(-1)D-葡萄糖),48 h和72 h后,采用半定量RT-PCR法检测4组培养细胞中CTGF mRNA与FN mRNA的表达差异,并采用免疫组织化学染色法检测FN蛋白表达的变化.结果:常规培养(低糖环境)的HKC细胞有基础量的CTGF mRNA和FN mRNA及FN蛋白的表达;与NG组比较,高糖环境下HKC细胞CTGF mRNA和FN mRNA及FN蛋白表达均增加(P<0.01,P<0.05);与HG组比较,经血竭素高氯酸盐干预48 h和72 h后,高糖培养组的CTGF mRNA和FN的mRNA及FN蛋白表达量明显下调,其差异有显著性(P<0.01,P<0.05);与NG组比较,DNG组的CTGF mRNA和FN的mRNA及FN蛋白质的表达量亦下调,但差异无显著性(P>0.05).结论:血竭素高氯酸盐能抑制高糖环境下的HKC中CTGF及FN的表达从而产生抗肾小管间质纤维化的作用,有望在DN的肾纤维化的治疗中发挥作用.
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血竭素高氯酸盐抑制高糖/SGK_1/FN通路防治糖尿病肾病小鼠肾纤维化
目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid inducible kinase 1,SGK_1)及其下游分子纤连蛋白(fibronectin,FN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾皮质中的表达以及血竭素高氯酸盐(dracohodin perchlorate,DP)抑制DN肾纤维化的机制.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立C57BL/6小鼠糖尿病肾病模型,设正常对照组、糖尿病肾病对照组、胰岛素治疗组及血竭素高氯酸盐5、10、20 mg/(kg·d)3种剂量治疗组,分别干预4周后,用RT-PCR、Western blot或免疫组化方法 检测各组小鼠肾皮质中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平.结果与正常组比较,糖尿病肾病模型组中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平显著性增高;与糖尿病肾病模型组比较,胰岛素治疗组和血竭素高氯酸盐20 mg/(kg·d)治疗组中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平显著降低,血竭素高氯酸盐10 mg/(kg·d)治疗组中SGK_1mRNA及蛋白的表达水平显著降低.结论 血竭素高氯酸盐能抑制高糖/SGK_1/FN通路,这可能是其防治DN小鼠肾纤维化作用的部分机制.
关键词： 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 纤连蛋白 血竭素高氯酸盐 糖尿病肾病 肾纤维化 -
中国药典中血竭药材含量测定方法的改进
目的 改进血竭药材检验标准中血竭素高氯酸盐的含量测定方法.方法 提取溶剂改为5％磷酸甲醇溶液,提取方法修订为“超声提取10 min后静置4h”.结果 血竭素含量测定结果稳定,测定值有较大提高.结论 该方法操作简便、快捷,能有效地改善血竭药材含量测定中测定数据不稳定、重现性差的情况.
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血竭素对瘢痕成纤维细胞增殖的影响
目的:观察天然药物血竭素高氯酸盐(dracorhodin perchlorate, Dp)对瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法:用四甲基偶氮唑(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)分别检测成纤维细胞的抑制率和细胞周期.结果:MTT法显示Dp对成纤维细胞的抑制率增高,且呈现浓度和时间依赖性(P＜0.01).FCM检测增殖指数,呈剂量依赖性降低(P＜0.01).结论:Dp对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用.
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活血止痛散的制备与质量控制
目的:制备活血止痛散并建立其质量控制方法.方法:采用薄层色谱法对活血止痛散中三七、乳香、血竭进行定性鉴别;采用薄层扫描法测定血竭中血竭素的含量.结果:血竭素高氯酸盐进样量在0.6μg～3.2μg范围内线性关系良好(r=0.9 999) ,平均加样回收率为98.22%(RSD=1.53%).结论:该制剂制备方法可行,质量控制方法简单、准确、重现性好.
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高效液相色谱法测定大七厘散中血竭素含量
目的 建立血竭素的含量测定方法,控制大七厘散的质量.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为 Hyper Clone BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μ m),流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(35:65),检测波长440 nm,柱温35 ℃,流速1 mL/min.结果 血竭素高氯酸盐质量浓度在2.96～14.80 μ g/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 8),平均加样回收率为 98.54%,RSD=1.36%(n=6).结论 HPLC法方便、快速、准确,可用于大七厘散的质量控制.
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血竭素高氯酸盐促进瘢痕成纤维细胞凋亡的作用
目的观察天然药物血竭素高氯酸盐对瘢痕成纤维细胞凋亡的影响,为开发有效治疗增生性瘢痕的新药提供实验依据.方法应用四甲基偶氮唑(MTT)法、特异性荧光染色和原位末端标记技术(TUNEL)分别检测血竭素高氯酸盐对成纤维细胞的抑制率和凋亡指数.结果 MTT法显示血竭素高氯酸盐对成纤维细胞的抑制率增高,且呈现浓度和时间依赖性(P<0.05).特异性荧光染色和TUNEL法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高(P<0.05).结论血竭素高氯酸盐对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡.
