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螺内酯、厄贝沙坦单用或联用对肾血管性高血压大鼠心肌纤维化的影响及其机制
背景国外研究发现醛固酮能诱导血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)+/+大鼠、结缔组织生长因子(CTGF)的表达和心肌纤维化,但在SGK-/-大鼠中醛固酮诱导的心肌纤维化过程完全被阻断,说明SGK1是醛固酮诱导心肌纤维化的必需条件.螺内酯与厄贝沙坦能否抑制心肌组织SGK1的表达,尚不清楚.目的 观察螺内酯和厄贝沙坦单用或联合应用对肾血管性高血压大鼠(RHR)心肌纤维化的疗效,观察心肌SGK1、CTGF表达的变化,探讨螺内酯、厄贝沙坦抑制心肌纤维化的可能机制.方法 采用两肾一夹法在SD大鼠中建立肾血管性高血压大鼠模型.随机分为5组:假手术组(n=8)、肾性高血压组(RHR组,n=8)、螺内酯组[20 mg/(kg·d),n=8]、厄贝沙坦组[50 mg/(kg·d),n=8]及联合用药组[联用组,螺内酯20 mg/(kg·d)+厄贝沙坦50 mg/(kg·d),n=8],每两周测定尾动脉收缩压.连续给药8周后测定左室心肌羟脯氨酸含量、心肌血管周围胶原面积(PVCA)/管腔面积、心肌胶原容积分数(CVF)等.放免法检测血浆及心肌中醛固酮水平,Western Blot法测定心肌中SGK1和CTGF蛋白的表达.结果 RHR血压显著升高,心肌羟脯氨酸含量、PVCA/管腔面积、CVF及心肌组织中SGK1、CTGF蛋白表达明显增加,药物治疗8周后螺内酯组收缩压稍降低,但差异无统计学意义(P>0.05),厄贝沙坦组与联用组收缩压显著降低(P<0.01);各治疗组心肌羟脯氨酸含量、PVCA/管腔面积、CVF及心肌组织中SGK1、CTGF的蛋白表达均降低,其中联用组效果优于单用药组(P<0.01或P<0.05),且心肌及血浆中醛固酮的含量降低.结论 螺内酯和厄贝沙坦联合应用改善肾血管性高血压大鼠心肌纤维化的作用明显优于单用药组,可能与调节醛固酮水平、减少心肌组织中SGK1和CTGF蛋白表达有关.
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胰岛素对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的调控研究
目的 研究胰岛素作用下肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基(ENaC-α)的变化及其对细胞凋亡的影响.方法 以人肺腺癌细胞株A549为对象,用含30 U/L的胰岛素培养基培养30 min和60 min,分别用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定ENaC-α及血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK-1)的蛋白及mRNA表达,并使用白屈菜红碱阻断蛋白激酶C(PKC)抑制SGK-1后再次测定ENaC-α蛋白表达.用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定经胰岛素处理后的A549细胞凋亡率.结果 用胰岛素培养30 min即可明显上调ENaC-α和SGK-1的蛋白及mRNA表达,并随处理时间延长表达量明显增加.若以未添加胰岛素培养A549细胞蛋白表达量为100%,胰岛素作用30 min时ENaC-α、SGK-1蛋白表达量为124%、135%,60 min时ENaC-α、SGK-1蛋白表达量为186%、176%(均P<0.05).胰岛素还可以抑制缺氧诱导的A549细胞凋亡(10.3%比21.6%,P<0.05).结论 胰岛素可以通过PKC、SGK-1途径上调ENaC-α表达,并抑制缺氧诱导的A549细胞凋亡,从而有利于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的预后.
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SGK1与代谢综合征
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1( SGK1)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,受多种因素的调控,参与调节多种生理功能.近年来研究表明,SGK1的表达及活性增加参与多种病理过程,与高血压、肥胖、糖尿病等的发生、发展密切相关.全面理解SGK1的生理功能,及其与代谢综合征的相关性及机制具有重要的意义.SGK1可能作为代谢综合征及相关组分治疗的新靶点.
关键词： 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 代谢综合征 作用机制 -
血竭素高氯酸盐防治糖尿病肾病小鼠肾损伤的作用及机制的研究
目的:探讨血竭素高氯酸盐对糖尿病肾病(DN)所致肾损伤的防治作用.方法:用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法建立DN小鼠模型.设血竭素高氯酸盐20、10和5 mg/(kg·d) 3个剂量治疗组,将血竭素高氯酸盐溶于等渗盐水中灌胃,以胰岛素治疗为对照组,同时设DN模型组及正常对照组.治疗4周后检测小鼠肾质量指数、肾小球细胞外基质(ECM)、24 h尿蛋白定量、血清肌酐清除率.用RT-PCR法检测血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤连蛋白(FN)的mRNA表达.结果:不同剂量血竭素高氯酸盐治疗组对SGK1、TGF-β1及FN的mRNA表达均有一定的抑制作用,其表达水平低于糖尿病(DM)模型组,其中血竭素高氯酸盐20和10 mg/kg组较正常对照组低(P＜0.05).血竭素高氯酸盐治疗组的肾质量指数、血清肌酐清除率、24 h尿蛋白定量及ECM均较DN模型组下降(P＜0.05).结论:血竭素高氯酸盐能防治小鼠DN的肾损伤,其机制可能与下调肾皮质TGF-β1、SGK1及FN的mRNA水平有关.
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血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在梗阻性肾病肾小球中的表达及姜黄素对其的影响
目的:探索在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病变进程中,血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1) 在肾小球中的表达变化及姜黄素对其的影响.方法:采用右侧输尿管接扎术诱导大鼠UUO模型,将54只大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组3组,每组18只.术后第3、7及14 d分别随机处死各组中的6只大鼠,检测血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr).应用免疫组化技术检测肾小球中SGK1蛋白的表达.结果:模型组大鼠肾小球中的SGK1蛋白的表达第3 d开始上调,第7 d和14 d继续升高.与模型组相比,姜黄素组BUN、SCr的改变不明显,但肾小球中的SGK1蛋白表达均显著下降.结论:随UUO肾病变发展,肾小球中SGK1 持续高表达,进一步提示SGK1在梗阻性肾病的肾小球纤维化病变进程中起重要作用.姜黄素能抑制肾小球中SGK1的表达,从而抑制肾小球的纤维化.
关键词： 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 单侧输尿管梗阻性肾 姜黄素 -
高糖通过SGK1通路促进人肾小球系膜细胞合成结缔组织生长因子
目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)产生结缔组织生长因子(CTGF)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小球硬化中的作用机制.方法 HMC分为低糖组(5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol·L-1 D-葡萄糖)和甘露醇对照组(19.5 mmol·L-1甘露醇和5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖),刺激24、72 h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CTGF mRNA及蛋白的表达;将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-S422DhSGK1,SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NhSGK1,KN)分别瞬时转染HMC;同时,设空质粒(pIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照.分别用低糖(LG,5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖)和高糖(HG,25 mmol·L-1 D-葡萄糖)刺激24、72 h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CTGF的mRNA及蛋白的表达.结果 与低糖组和甘露醇组相比较,在高糖刺激下,HMC中CTGF mRNA及蛋白的表达明显上调;低糖环境下,转染SD的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显增加.转染KN的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达差异无显著性;高糖环境下转染SD的HMC与转染KN、转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显增加.转染KN的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显减少.结论 在DN中,高糖能促进HMC的CTGFmRNA及蛋白的表达,并且可以通过SGK1介导的信号通路来诱导人肾小球系膜细胞增加合成CTGF,这种新发现的信号通路,表明SGK1可能通过促进CTGF的合成来参与糖尿病肾病肾小球纤维化的发生.
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坎地沙坦对糖尿病肾病小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1表达的影响及意义
目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1)拮抗剂坎地沙坦(candesartan)对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)表达的影响及意义.方法采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病肾病(DN)模型.将正常C57BL/6小鼠随机分成3组,每组12只:正常对照组(N组)、糖尿病肾病组(D组)、Candesartan治疗组(DC组).治疗8 wk后取肾组织,观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR法检测各组肾皮质SGK1 及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;Western blot检测各组肾皮质中SGK1及CTGF蛋白的表达.结果与N组相比,D组小鼠肾重/体重、24 h尿蛋白量,肾小球滤过率均明显增加;肾皮质中SGK1、CTGF mRNA及蛋白质的表达均明显升高.经Candesartan干预后(DC组),相应生化指标较D组有明显改善,SGK1、CTGF的表达水平较D组亦有明显下调.纤维化指标CTGF的表达与SGK1呈正相关.结论 Candesartan可以延缓糖尿病肾病的肾脏纤维化过程,它对细胞内SGK1信号转导途径的抑制作用可能是其抗纤维化作用的主要环节,该作用与AngⅡ-AT1途径被阻断有关.
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血竭素高氯酸盐抑制高糖/SGK_1/FN通路防治糖尿病肾病小鼠肾纤维化
目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid inducible kinase 1,SGK_1)及其下游分子纤连蛋白(fibronectin,FN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾皮质中的表达以及血竭素高氯酸盐(dracohodin perchlorate,DP)抑制DN肾纤维化的机制.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立C57BL/6小鼠糖尿病肾病模型,设正常对照组、糖尿病肾病对照组、胰岛素治疗组及血竭素高氯酸盐5、10、20 mg/(kg·d)3种剂量治疗组,分别干预4周后,用RT-PCR、Western blot或免疫组化方法 检测各组小鼠肾皮质中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平.结果与正常组比较,糖尿病肾病模型组中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平显著性增高;与糖尿病肾病模型组比较,胰岛素治疗组和血竭素高氯酸盐20 mg/(kg·d)治疗组中SGK_1和FN mRNA及蛋白的表达水平显著降低,血竭素高氯酸盐10 mg/(kg·d)治疗组中SGK_1mRNA及蛋白的表达水平显著降低.结论 血竭素高氯酸盐能抑制高糖/SGK_1/FN通路,这可能是其防治DN小鼠肾纤维化作用的部分机制.
关键词： 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 纤连蛋白 血竭素高氯酸盐 糖尿病肾病 肾纤维化 -
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在糖尿病小鼠肾皮质中的表达变化
目的 探索在糖尿病(diabetes mellitus, DM)肾脏病变进程中,血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase 1, SGK1)在肾皮质中的表达变化.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)单次腹腔注射诱导小鼠DM模型,设DM组和正常对照(normal control, NC)组,在DM模型1、3、4、6和12周时,检测肾重指数、血糖和糖化血红蛋白(HbA1c),RT-PCR 方法检测肾皮质SGK1 mRNA的表达,Western blot法检测肾皮质SGK1蛋白的表达,同时应用免疫组织化学技术检测肾皮质中肾小球的SGK1蛋白的表达.结果 与NC组相比,从第1周末起到第12周末DM组小鼠肾重指数、血糖和HbA1c均显著增加;第1周末肾皮质SGK1 mRNA和蛋白以及肾小球中SGK1蛋白的表达即开始上调,到第4周末肾皮质SGK1 mRNA和蛋白表达达到顶峰,第6周至第12周仍有较高表达.结论 随DM肾脏病变发展,肾皮质及肾小球中SGK1持续高表达, 进一步提示它在DM肾脏病变进程中起重要作用.
关键词： 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 糖尿病 肾病 -
SGK1在血清和母胎界面的表达及其与稽留流产的关系
目的 检测血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在稽留流产患者血清、绒毛和蜕膜组织中的表达,并探讨其与流产发生的可能机制.方法 选择2017年2至7月于徐州医科大学附属医院住院的稽留流产患者32例及正常早孕妇女30例,采用酶联免疫吸附法检测患者血清中SGK1和Toll样受体—4(TLR4)的表达水平,采用免疫组化法检测各组绒毛及蜕膜组织中SGK1、TLR4和核因子—κB(NF-κB)的表达水平,分析其相关性.结果 稽留流产组血清中SGK1的表达均明显降低(t=8.145,P<0.05),T LR4的表达均明显升高(t=4.919,P<0.05);二者表达呈负相关(r= —0.358,P<0.05);稽留流产组绒毛蜕膜组织中SGK1的表达均明显降低(χ2=7.869,P<0.05),TLR4与 NF-κB表达均明显升高(χ2值分别为11.486、14.609,均 P<0.05),SGK1与TLR4、NF-κB的表达均呈负相关(r值分别为—0.527、—0.662,均 P<0.05).结论 稽留流产患者血清、绒毛和蜕膜组织中SGK1的表达下调可能与流产的发生密切相关,其机制可能与SGK1/TLR4/NF-κB信号通路有关.
关键词： 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1 Toll样受体4 稽留流产 母胎界面
