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应用TT法测定家兔尿液中重组水蛭素浓度的方法学研究
目的:建立一种生物测定法--凝血酶时间法(TT法),以测定家兔尿液中的重组水蛭素(rH),进而研究其尿药排泄动力学.方法:依据rH的抗凝血酶活性,采用TT法测定家兔尿中的rH浓度.取家兔尿液10 μL,依次加入空白血浆40 μL、pH 7.4的Tris-HCl缓冲液50 μL,以及5 u·mL-1的凝血酶溶液50 μL,由血凝仪记录凝血时间并计算凝血时间延长百分率,从标准曲线求出待测尿液中的rH浓度.结果:TT延长百分率(Y)经对数转换与尿液中rH浓度(X,μg·mL-1)呈线性相关,线性方程为Y=0.7598X+1.0098,r=0.9956,线性范围0.49～2.50 μg·mL-1,低检测限为0.49 μg·mL-1.高、中、低3种浓度rH尿液标准溶液测得的日内精密度RSD小于8.10%,日间精密度RSD小于9.07%,回收率为95.6%～97.7%,稀释回收率大于95.6%(5～200倍稀释)和91.9%(500倍稀释).水蛭素尿液标准溶液冰冻(-20℃)保存至少半月内稳定,0～4℃及室温保存至少8 h内稳定,-20℃及室温反复冻融3次稳定.3只家兔iv rH 1.0 mg·kg·1后不同时间段收集尿液,应用TT法测定其rH浓度,经亏量法求得rH的消除半衰期为65.4 min,其log(Xu∞-Xut)-t作图符合尿药排泄动力学曲线.结论:应用TT法测定家兔尿中的rH浓度,方法特异性高、精密度好、回收率高、线性好,结果准确可靠,可用于家兔尿中rH浓度的测定和尿药排泄动力学的研究.
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水蛭素检测方法研究进展
水蛭素是从水蛭的唾液腺中提取的天然多肽,它是凝血酶的天然抑制剂,有很好的抗凝、抗血栓作用,对多种血栓疾病都有很好的预防效果.但是天然水蛭素产量低,价格昂贵,限制了它在临床上的运用.重组水蛭素的出现改变了这种状况.目前临床已开始应用重组水蛭素治疗血栓类疾病,水蛭素的活性和纯度直接影响其疗效,所以选择合适的检测手段至关重要,本文系统总结近年来国内外水蛭素的分析检测方法.
