首页 > 文献资料
-
甘油对毕赤酵母高密度发酵表达重组水蛭素Ⅱ的影响
目的:考察甘油对毕赤酵母生长和重组水蛭素Ⅱ表达的影响.方法:在摇瓶和10L发酵罐中用含有不同浓度甘油的培养基培养毕赤酵母,测定毕赤酵母的生长和重组水蛭素Ⅱ的表达.结果:发酵培养基中初始甘油浓度为5g/L时,毕赤酵母生长速度明显加快;补料过程中甘油浓度大于70g/L时,毕赤酵母生长受到抑制.与不加甘油相比较,诱导表达期维持培养基中甘油浓度在5g/L以下,重组水蛭素表达可提前4 h,诱导30 h其活性达13 000 ATU/mL,比仅用甲醇诱导时效价提高了7.7%.结论:降低初始培养基中甘油浓度有利于毕赤酵母生长,补料过程中培养基甘油浓度应维持在抑制毕赤酵母生长的浓度之下,诱导阶段培养基中少量的甘油有利于水蛭素的表达.
-
重组水蛭素对实验性白内障的防治作用
目的:观察重组水蛭素(Recombinant hirudin,R-h)对实验性白内障的影响和对眼的刺激性.方法:采用D-半乳糖诱发哺乳期大鼠白内障模型和亚硒酸钠诱发哺乳期大鼠白内障模型进行试验,并用家兔进行眼刺激性试验.结果:R-h能减轻D-半乳糖和亚硒酸钠诱发哺乳期大鼠白内障模型的晶状体浑浊度,升高晶状体超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低晶状体丙二醛(MDA)含量,对家兔眼无刺激性.结论:R-h对实验性白内障具有较好的防治作用,对眼无明显局部刺激性.
-
发酵液中重组水蛭素的分离纯化
目的:建立毕赤酵母(pichia)高密度表达的重组水蛭素(recombinant hirudin-2,rHV2)分离纯化工艺.方法:高密度培养重组毕赤酵母并诱导表达水蛭素至胞外,发酵液经超滤、透析、离子交换层析,分离纯化rHV2目的蛋白;采用SDS-PAGE和抗凝血酶活力分别检测目的蛋白纯度和活性.结果:纯化样品经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,重组水蛭素比活性为6000 ATU/mg,纯化收率达38.6 %.结论:超滤、透析和离子交换层析可用于发酵液中大规模分离纯化重组水蛭素.
-
重组水蛭素Ⅲ的抗凝与抗血栓作用研究
目的研究了自行研制的重组水蛭素Ⅲ在大肠杆菌中的分泌表达产物的抗凝与抗血栓作用.方法采用大鼠下腔静脉血栓模型和大鼠体外A-V循环模型进行水蛭素Ⅲ(HV3)的抗凝及抗血栓作用研究.结果给予重组水蛭素25,50 μg/kg两剂量的大鼠下腔静脉血栓重量分别为21.30±7.35 mg和10.40±16.20 mg,生理盐水对照组为59.50±4.95 mg;重组水蛭素50、25 μg/kg的血栓湿重为15.3±3.6 mg 和21.5±5.3 mg,生理盐水对照组为48.6±4.9 mg.结论重组水蛭素Ⅲ可显著减少静脉血栓重量,能显著地降低体外循环的血栓湿重,与生理盐水组比较具有很显著的差异,结合体外抗凝实验等结果表明,重组水蛭素Ⅲ具有很强的体外和体内抗凝抗栓作用,应用前景良好.
-
水蛭素及重组水蛭素的研究概况
目的 综述水蛭素、重组水蛭素的药理作用与临床应用研究进展,为其临床应用提供参考.方法 依据近年采国内外文献,进行分析、归纳和总结.结果 与结论水蛭素、重组水蛭素是迄今发现的活性强的特异性凝血酶抑制剂,通过与凝血酶特异性结合而产生强有力地抑制血液凝固的作用,在心、脑血管系统疾病等方面的抗凝、抗血栓的应用广泛,药物开发前景广阔.
-
重组水蛭素对UUO大鼠肾间质纤维化影响及机制研究
目的:探讨重组水蛭素(recombinant hirudin,rH)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠对肾间质纤维化(RIF)的作用及其可能机制研究.方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组(N组)、模型组(M组)、依那普利治疗组(Y组)和重组水蛭素组(R组),后3组建立UUO大鼠模型.治疗结束后处死大鼠,测大鼠肾功能,行HE、Masson染色观察肾间质病理变化,用免疫组化半定量法测定肾TGF-β1、α-SMA的表达.结果:两治疗组大鼠BUN、SCr低于模型组(P＜0.01),两治疗组组间差异无统计学意义(P＞0.05);免疫组化结果表明,两治疗组TGF-β1和α-SMA的表达量均低于模型组(P＜0.01),两治疗组组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:重组水蛭素可能通过下调TGF-β1和α-SMA,减少促纤维化生长因子及肌成纤维细胞的增殖、活化、表型转化从而起到防治RIF.
-
注射用水蛭低肽冻干粉针剂药效学研究
目的 观察注射用水蛭低肽冻干粉针剂的体内抗凝、抗粘及溶栓作用.方法 通过毛细管法测定各组小鼠凝血时间的差别;通过注射盐酸肾上腺素及冰水刺激造成大鼠血瘀模型,再比较空白组、模型组、对照组及高中低剂量组的血栓湿长、湿重、干重,及血流变、血沉、红细胞压积.结果 注射用水蛭低肽冻干粉针剂20、40、80 μg·kg-1能显著延长小鼠的凝血时间,并能显著降低血瘀大鼠的血栓湿重、湿长及干重,血沉及红细胞压积.40、80 μg·kg-1能降低血瘀大鼠的全血粘度,而且剂量均较重组水蛭素低.结论 自制的注射用水蛭低肽冻干粉针剂与重组水蛭素药理活性相似,具有明显的抗凝、降粘、降脂作用.
-
水蛭素的药理与临床应用研究进展
综述水蛭素、重组水蛭素的药理作用与临床应用研究进展,为其临床应用提供参考.
-
重组水蛭素抗大鼠冠状动脉血栓形成的作用研究
目的探讨重组水蛭素(rH)对大鼠冠状动脉血栓形成的抑制作用.方法将160只SD大鼠随机分为8组,每组20只,实验组1～4分别静脉注射rH1.000,0.500,0.250,0.125 mg·kg-1;实验组5静脉注射Refludan,0.500mg·kg-1;实验组6静脉注射肝素2 000 U·kg-1;模型组静脉注射等量0.9%氯化钠注射液;对照组不给药.10 min后将大鼠麻醉开胸,将吸有50%三氯化铁溶液的滤纸片贴于实验组1～6和模型组大鼠的冠状动脉前降支根部,60min后取下,以制备大鼠冠状动脉血栓模型.对照组大鼠冠状动脉前降支根部敷贴不合三氯化铁溶液的滤纸片.考察各组大鼠心肌缺血面积评分、左心室伊文思蓝含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,并做心肌病理形态学检查.结果实验组1～5大鼠心肌缺血面积评分分别为12,16,24,28,19分,均明显低于模型组(39分)(均P＜0.01);实验组1～3和实验组5,6心肌伊文思蓝含量明显低于模型组(均P＜0.01);实验组1心肌SOD活力[(54.64±12.05)NU·mg-1]明显高于模型组[(30.46±8.73)NU·mg-1](P＜0.01),实验组2,3,6心肌SOD活力亦高于模型组(均P＜0.05);实验组1,2,5心肌MDA含量明显低于模型组(均P＜0.01),实验组3,6亦低于模型组.病理学检查可见实验组3,4大鼠冠状动脉有血栓形成,实验组2血栓形成明显减轻.结论受试rH具有明显的抗冠状动脉血栓形成的作用,且该作用呈剂量依赖性.
-
重组水蛭素药理学研究进展
1955年Markwardt从医用水蛭咽周腺体中成功地分离出水蛭素纯品[1].
-
水蛭素及其重组技术的研究进展
传统中药水蛭中提取的活性成分水蛭素是凝血酶的天然抑制剂,具有抗凝、抗血小板凝聚等药理作用,在血栓疾病的临床应用中有重要的意义.重组水蛭素是基因工程的产物,与天然水蛭素具有相同的功效,质量更加稳定可控,它能与血浆中的凝血酶结合,为新一代高效安全的抗凝、防栓药物.本文综述水蛭素的来源、药理作用、临床应用及重组技术的研究概况.
-
水蛭素及其临床应用
水蛭是我国传统中药中常用的活血化瘀药,始载于《神农本草经》,历代本草均有记载.水蛭属于环节动物,俗称蚂蟥.水蛭及其唾液中含有多种活性成份,如:水蛭素(hirudin)、纤维蛋白溶酶活化剂(bementin)、中性粒细胞蛋白抑制剂(eglins)等.水蛭素是水蛭中的重要活性成分.1884年Haycraft发现药用水蛭的提取物中含具有抗凝血活性的物质.1955年这种物质被Mark wardt确定为蛋白质,并命名为水蛭素.1957年水蛭素被成功分离纯化,但天然的水蛭素资源有限,上个世纪八十年代随着分子生物学与基因工程技术的发展,开始采用DNA重组技术生产重组水蛭素.
-
ELISA法研究重组水蛭素在比格犬体内的药动学
目的 建立一种酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,测定比格犬血液中重组水蛭素浓度,进而研究其药动学特点.方法 选取合格比格犬6只,静脉注射重组水蛭素0.2 mg/kg,于给药后2、5、10、20、40、60、120、240和480 min取血2 mL,分离血清,用ELISA检测其血药浓度.结果 静脉注射重组水蛭素的T1/2α(0.37±0.029)h,T1/2β(2.64±0.92)h;ATU0-T(372.98±27.87)ng/(mL·h).结论 经ELISA测定血中的药物浓度,药时曲线经3P97拟合,表明静脉注射重组水蛭素在动物体内为二室模型.
-
重组水蛭素肠溶胶囊单次和多次给药在Beagle犬体内的药动学研究
目的:研究重组水蛭素肠溶胶囊单次和多次给药在Beagle犬体内的药动学特征.方法:取12只Beagle犬按随机对照法分为单次ig组和单次iv组,每组6只,按0.2 mg/kg ig或iv重组水蛭素,收集血样;清洗2周后12只犬按0.2 mg/kg ig重组水蛭素,连续给药7 d,收集血样,作为多次ig组.采用酶联免疫吸附法测定血浆中重组水蛭素浓度,以DAS 2.0软件计算药动学参数.结果:单次ig和单次iv重组水蛭素在Beagle犬体内药动学特征均符合二室模型,ig重组水蛭素肠溶胶囊的绝对生物利用度为(14.908±1.868)%;单次ig组和多次ig组犬体内重组水蛭素的tpeak分别为(2.105±0.243)、(3.000±0.000)h,t1/2β分别为(8.660±2.965)、(14.870±2.710)h,cmax分别为(10.700±0.872)、(12.05±1.587)ng/mL,AUC0-1440 min分别为(55.250±4.386)、(58.978±6.002)ng·h/mL,两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:ig重组水蛭素肠溶胶囊可一定程度被吸收入血;连续多天ig重组水蛭素肠溶胶囊在犬体内不产生蓄积,不改变其药动学特征.
-
口服重组水蛭素抗凝、抗血栓作用的实验研究
目的:探讨口服重组水蛭素的抗凝、抗血栓的作用.方法:将24只Beagle犬,随机分为水蛭素大、中、小剂量组剂量分别为(600,300,150 AUT/kg)和空白对照组,每组6只.各试验组动物均经口给药,分别于给药前、达稳态前和达稳态后取血1～4 mL,测定凝血时间(CT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶凝固时间(TT)、纤维蛋白原(FBG)、活化部分凝血活酶时间(APTT);同时采用下腔静脉结扎法制作血栓模型,计算深静脉血栓形成百分率和血栓重量.结果:各用药组CT,PT,TT,APTT值与空白对照组均有差异或显著差异(P＜0.05或P＜0.01),给药对FBG没有明显影响;深静脉血栓形成百分率和血栓重量也有差异或显著差异.结论:口服重组水蛭素具有很强的特异性凝血酶抑制作用,同时具有抗凝、抗血栓作用,可用于防治实验性深静脉血栓形成.
-
重组水蛭素对大鼠皮肤撕脱伤中CD11b/CD18及ICAM-1动态表达影响的研究
目的:通过局部运用重组水蛭素对大鼠皮肤撕脱伤中黏附因子CD11b/CD18及ICAM-1动态表达的研究,探讨重组水蛭素对皮肤撕脱的保护与该三项指标之间是否有密切关系,以及对撕脱皮瓣成活率的影响变化及作用机理.方法:设计为蒂在侧腹部的任意皮瓣,并给予牵拉证实为撕脱皮瓣后进行实验,实验组注射水蛭素40 IU(1 mL),对照组注射等量生理盐水,正常观察组不做任何处理,直接抽取外周血液及切取皮肤进行检测;实验组及对照组分别于6个时间点抽取外周血,运用流式细胞仪检测CD11b/CD18在中性粒细胞的阳性表达率,切取皮瓣远端组织运用免疫组织化学染色检测血管内皮细胞膜表面ICAM-1的表达并定量分析,综合了解三者的动态变化,留取的大鼠观察皮瓣愈合情况并计算撕脱皮瓣成活率.结果:术后两组皮瓣均出现充血水肿现象,虽然随着时间的推移实验组及对照组CD11b/CD18阳性表达都在上升,但是,局部运用水蛭素后黏附因子阳性表达率明显低于对照组(P<0.05);对照组ICAM-1阳性表达率明显高于实验组(P<0.01);经观察发现实验组皮瓣的愈合成功率较空白对照组有明显的提升.结论:局部运用重组水蛭素对大鼠皮肤撕脱伤具有有效减低血液中黏附因子CD11b/CD18及组织中ICAM-1的作用,减少组织炎症反应,改善缺血再灌注过程中对血管内皮细胞的损伤,从而显著提高皮肤撕脱伤后皮瓣的愈合率.
关键词： 重组水蛭素 皮肤撕脱伤 CD11b/CD18 ICAM-1 -
重组水蛭素局部治疗球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄的实验研究
目的:探讨重组水蛭素经多孔球囊导管局部治疗兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄的作用.方法: 24只纯种日本大耳白兔随机分成对照组(n=12)和重组水蛭素局部治疗组(n=12),采用兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄动物模型,治疗组经多孔球囊导管于球囊扩张局部在2 个大气压下给予重组水蛭素refludin (14.5×106 ATU·g-1) 1 mg·kg-1,对照组给予生理盐水.术后2周和4周复查血管造影,术后4周取髂总动脉标本行HE染色、Masson三色染色、平滑肌肌动蛋白(α-actin)免疫组织化学染色和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,并进行计算机图象分析.结果:治疗组术后2周和4周血管造影平均髂总动脉直径分别较对照组扩大59.9%(P<0.01)和61.6% (P<0.01),平均髂总动脉面积分别较对照组扩大135.6%(P<0.01)和191.1%(P<0.01).图象分析示球囊扩张术后4周治疗组髂总动脉血管腔面积较对照组扩大113.04% (P<0.01),管壁面积和内膜面积分别减少29.20% (P<0.01) 和82.00% (P<0.01).术后4周治疗组球囊扩张血管壁α-actin和PCNA免疫组化染色阳性细胞均较对照组明显减少.结论: 重组水蛭素经多孔球囊导管局部治疗,可显著减轻兔髂总动脉球囊扩张术后新生内膜增殖和管腔狭窄.
-
重组水蛭素对兔髂总动脉球囊损伤后内膜增殖影响的实验研究
目的:探讨重组水蛭素对兔髂总动脉球囊损伤后内膜增殖的影响.方法:24只纯种日本大耳白兔随机分成肝素对照组(n=12)和重组水蛭素组(n=12),采用兔髂总动脉球囊扩张损伤后内膜增殖动物模型,术后2周和4周复查血管造影,术后4周处死动物取髂总动脉标本.结果:用药组术后2周和4周平均髂总动脉直径均较对照组明显增加(P<0.01),4周后新生内膜面积显著减少(P<0.01),管腔面积明显扩大(P<0.01).结论:重组水蛭素可显著减轻兔髂总动脉球囊扩张损伤后新生内膜增殖和管腔的狭窄.
-
重组水蛭素局部治疗兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄
目的探讨重组水蛭素经多孔球囊导管局部治疗对兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄的影响. 方法 24只纯种日本大耳白兔随机分成对照组(n=12)和重组水蛭素局部治疗组(n=12),采用兔髂总动脉球囊扩张术后内膜增殖和管腔狭窄动物模型,治疗组经多孔球囊导管于球囊扩张局部在2个大气压下给予重组水蛭素(13.8×106抗凝血酶单位*g-1) 1 mg*kg-1,对照组给予生理盐水. 术后2 wk和4 wk复查血管造影,术后4 wk取髂总动脉标本行HE染色、Masson三色染色、平滑肌肌动蛋白(α-actin)免疫组织化学染色和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,并进行计算机图像分析. 结果治疗组术后2 wk和4 wk平均髂总动脉直径均较对照组显著扩大[2 wk (86±5)% vs (56±10)%,P<0.01; 4 wk (77±13)% vs (56±10)%,P<0.01],术后2 wk和4 wk平均髂总动脉面积亦显著增加. 术后4 wk治疗组球囊扩张血管管腔面积较对照组显著增加[(37±5)% vs (16±5)%, P<0.01],管壁面积显著减少[(63±5)% vs (84±5)%, P<0.01],其中主要是内膜面积的减少[(7±1)% vs (38±10)%, P<0.01]. 术后4 wk治疗组球囊扩张血管壁α-actin和PCNA免疫组化染色阳性细胞均较对照组明显减少. 结论重组水蛭素经多孔球囊导管局部治疗可显著减轻兔髂总动脉球囊扩张术后新生内膜增殖和管腔狭窄.Effectiveness of recombinant hirudin locally delivered via a porous balloon on reducing neointimal proliferation and luminal stenosis after balloon angioplasty in a rabbit model
-
重组水蛭素与喉癌细胞Hep-2中PAR1、VEGF、MMP-2表达的相关性研究
目的 检测喉癌及癌旁组织中蛋白酶活化受体1(PAR-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白-2(MMP-2)的表达,及重组水蛭素(Recombinant hirudin)对喉癌细胞Hep-2中PAR-1、VEGF、MMP-2表达的影响,探讨PAR-1、VEGF、MMP-2在喉癌侵袭及转移中的作用及重组水蛭素的抗肿瘤机制.方法 采用免疫组化方法检测喉癌组织及癌旁组织中PAR-1、VEGF、MMP-2的表达;用免疫细胞化学方法检测重组水蛭素共培养和不加入重组水蛭素培养的喉癌细胞中PAR-1、VEGF、MMP-2的表达.结果 PAR-1、VEGF、MMP-2在喉癌组织及有淋巴结转移的癌旁组织中呈高表达,差异有统计学意义;PAR-1、VEGF、MMP-2在重组水蛭素共培养和不加入重组水蛭素培养的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 证实PAR-1、VEGF、MMP-2参与了喉癌的侵袭及转移;重组水蛭素的抗肿瘤及抑制肿瘤转移作用可能与其降低喉癌细胞中PAR-1、VEGF、MMP-2表达有关.
