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NF-κB在马钱子碱抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2生成中的作用研究
目的:探讨马钱子碱抑制环氧化酶2(COX-2),从而诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制.方法:构建COX-2启动子若干转录因子缺失突变体与含COX-2 mRNA3′-UTR的报告质粒,与Renillia共转染至非小细胞肺癌A549细胞,测报告基因luciferase活性研究COX-2启动子受马钱子碱抑制的小顺式作用元件;采用蛋白质免疫印迹法研究马钱子碱对IκBα磷酸化与p65进核的影响.结果:马钱子碱显著性抑制LPS诱导的COX-2启动子的激活,而对COX-2 mRNA转录后调控影响不大,COX-2启动子-262位附近NF-κB是马钱子碱抑制COX-2启动子活性的重要顺式作用元件.马钱子碱能抑制IκBα的磷酸化,并能抑制p65的进核.结论:马钱子碱抑制NF-κB的激活,进而从转录水平COX-2的基因表达,促进A549细胞凋亡.
关键词： 马钱子碱 非小细胞肺癌细胞A549 环氧化酶2 NF-κB -
LHRH-PE40对非小细胞肺癌细胞A549的作用
目的 研究促黄体激素释放激素(LHBH)基因与绿脓杆菌外毒素A(PE4O)基因重组蛋白(LHBH-PE40)对非小细胞肺癌细胞A549的毒性作用.方法 从用扫描电镜观察LHRH-PE40对A549细胞产生的细胞毒性作用,用流式细胞仪检测LHRH-PE40对A549细胞周期的影响.结果 扫描电镜观察可见LHRH-PE40对A549细胞产生的毒性作用使A549细胞表面凸凹不平,流式细胞仪检测发现LHRH-PE40使A549细胞出现明显的凋亡.结论 LHRH-PE40可以诱导A549细胞凋亡.
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Nupr1调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究
目的:探讨核蛋白1 (Nupr1)调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究.方法:肿瘤抑制剂盐酸素(salinomycin)不同时间处理非小细胞肺癌细胞A549后采用Western Blot法检测非小细胞肺癌细胞A549中Cleaved Caspase-3、Nupr1的蛋白表达;Transwell小室检测Nuprl基因沉默后非小细胞肺癌细胞A549细胞体外迁移、侵袭能力的变化;Western Blot法检测Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549 MMP-2、TIMP-1的蛋白表达;流式细胞仪检测Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549的凋亡情况.结果:与未经肿瘤抑制剂salinomycin处理对照组相比较,salinomycin处理后的非小细胞肺癌细胞A549中Nupr1蛋白表达量下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达量升高,并且随着作用时间呈依赖关系.Nupr1-siRNA转染组的迁移能力相比对照组未转染组下降(64.4±7.2)％,Nupr1-siRNA转染组的侵袭能力相比对照组下降(58.7±7.3)％.与未转染Nupr1-siRNA对照组相比较,转染后TIMP-1的表达明显上调,而MMP-2的表达则明显下调.流式细胞仪检测结果显示Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549出现大量凋亡.结论:Nupr1基因沉默后通过上调TIMP-1的表达,下调MMP-2的表达降低肺癌A549细胞的侵袭和迁移能力,进而促进非小细胞肺癌细胞凋亡.
关键词： Nupr1 非小细胞肺癌细胞A549 Nupr1-siRNA 细胞凋亡
