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麦冬皂苷D通过上调CYP2J2/EETs抗AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡
探讨麦冬皂苷D(OP-D)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导内皮细胞凋亡的影响及其机制,为中药的安全性及有效性提供参考依据.MTT法检测AngⅡ对细胞存活率的影响;检测OP-D对AngⅡ诱导的细胞总蛋白含量的影响;酶标仪测定OP-D对AngⅡ诱导的细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响;Western blot和RT-PCR法检测OP-D及外源性1 1,12-EET对AngⅡ诱导的细胞中JNK及其下游靶分子c-Jun的磷酸化水平表达;流式法检测细胞凋亡率;后进一步借助CYP450酶抑制剂PPOH及JNK特异性抑制剂SP600125,探究OP-D保护内皮细胞的可能内在机制.结果显示,不同剂量的AngⅡ(1×10-8～1×10-6 mol·L-1)对细胞存活率没有显著的影响,1×10-6 mol· L-1的AngⅡ处理24h可诱导细胞总蛋白含量的增加(P＜0.05,P＜0.01),刺激LDH释放率的增多(P＜0.001),JNK和c-Jun的磷酸化水平明显增加(P ＜0.01,P＜0.001),caspase-3的蛋白表达上调(P＜0.01),细胞凋亡率增高(P＜0.001).提前给予SP600125显著抑制了JNK和c-Jun的磷酸化水平.OP-D预处理后,能明显降低AngⅡ诱导的细胞总蛋白含量(P＜0.01)及LDH的释放(P＜0.01,P＜0.01),减少JNK和c-Jun的磷酸化水平,降低caspase-3的表达及细胞凋亡率,提前给予PPOH后,OP-D保护效应被抑制.1 1,12-EET预处理降低JNK和c-Jun的磷酸化水平(P＜0.05).结果表明AngⅡ通过JNK/c-Jun途径诱导细胞凋亡;OP-D通过诱导CYP2J2表达及增加11,12-EET含量抗AngⅡ激活JNK/c-Jun通路所诱导的细胞损伤及凋亡.
关键词： 麦冬皂苷D CYP2J2/EETs 血管紧张素Ⅱ JNK/c-Jun 细胞凋亡
