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北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立
以花粉发育处于单核期的北柴胡花药为外植体诱导出愈伤组织,愈伤组织经多次继代培养后,置于20种含不同植物激素的分化培养基上诱导分化.分别在培养21,49 d后,统计每种培养基中分化出苗数,同时观察再生植株生长状况,从中筛选出分化率高,分化速度快,且植株生长状态良好的分化培养基.结果共在19种培养基均可分化出苗,分化率在3％ ～60％,大部分低于20％.在MS+KT0.5 mg·L-1+蔗糖30g· L-1+植物凝胶5g·L-1培养基上分化率高,为60％,其次为MS+ ZT l.0 mg·L-1+蔗糖30g· L-1+植物凝胶5g·L-1,为58％.另外,针对在分化培养基中未能生根的再生芽,进行了生根培养基筛选.结果显示再生芽在生根培养基MS+蔗糖30 g·L-1+植物凝胶5 g·L-1和1/2 MS+NAA 0.5mg· L-1+蔗糖30g·L-1+植物凝胶5g·L-1中均可生根,生根率均为100％.由此建立了北柴胡花药愈伤组织高效稳定的再生体系.
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红花遗传转化受体系统的建立及转酸性成纤维细胞生长因子aFGF的初步研究
目的:将aFGF与红花的油体蛋白融合,转入红花中,直接通过提取红花油来实现红花与aFGF的双重功效.方法:以不同日龄的红花子叶为外植体,采取正交试验设计的方法,摸索出红花再生体系的佳条件.然后通过农杆菌介导法将aFGF基因转入到红花中,对不同浓度的抗生素进行筛选,进行PcR鉴定,计算阳性率.结果:根据不同的激素配比,确定了红花分化的佳培养摹为MS+BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1);生根的适培养基为1/4 MS+N从2.0 mg·L~(-1)+IAA 0.5 mg·L~(-1).3种不同种类和浓度的抑菌抗生素对红花浸染后的抑菌效果略有不同,结合抑菌效果,污染率,芽的分化率以及成本问题等因素的综合考虑,抑菌抗生素选择用Tim,质量浓度为400 mg·L~(-1)即可抑制细菌的生长,同时有利于芽的分化;hyg的筛选压力则选择6 mg·L~(-1)为它的临界浓度;对8棵转化植株进行鉴定,阳性率为25%.结论:通过器官发生途径,确定出红花分化与生根的佳激素组合与配比,建立了红花的再生体系;确定出适的抑菌抗生素与筛选抗生素的浓度;经过筛选获得的再生植株,通过PCR检测,部分扩增出aFGF目的基因,证实了aFGF基因整合到红花基因组中.这为红花作为植物生物反应器的研究奠定了扎实的基础.
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杜仲胚轴、子叶直接诱导不定芽及再生体系的建立
目的 探索杜仲胚轴、子叶不定芽诱导条件,建立杜仲再生体系.方法 分别以杜仲种胚、胚轴切段、子叶切段、芽为外植体,将它们接种到一系列含有不同激素质量浓度的培养基中.结果 在外植体的选择上,胚轴优于子叶.对于杜仲胚轴的伸长生长,以MS培养基附加2.0 mg/L GA效果好.在含有0.1 mg/L NAA及0.8 mg/L 6-BA的MS培养基中,杜仲胚轴可直接诱导产生不定芽,诱导率达到47%.在壮芽及生根培养中,分别采用附加1.0 mg/L6-BA、0.1 mg/LNAA的MS培养基及附加1.5 mg/L IBA、20 mg/L蔗糖的1/2 MS培养基效果好,经28、14 d,芽苗生长系数及生根率分别达到2.48和91.7%.结论 建立了稳定高效的杜仲再生体系,为外源基因导入杜仲奠定了基础.
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籼型杂交稻亲本成熟胚愈伤组织再生体系的建立
本文给出了6个籼型杂交稻亲本成熟胚愈伤组织再生体系建立优化措施.采用6个有重要育种价值的杂交籼稻亲本成熟胚盾片诱导愈伤组织作为分化再生的外植体,通过调节2,4-D浓度、培养基成分、接种方式、激素组合和愈伤组织分化途径,建立适合籼稻遗传转化的再生体系.结果表明,MB培养基是较为合适的愈伤组织诱导培养基类型,6个品种在MB培养基上的愈伤组织诱导率均在60%-80%之间.半粒米的接种方式能够明显提高愈伤组织诱导率,提高幅度达到28.2%.通过调节2,4-D浓度和激素组合,愈伤组织诱导率高可达到97.9%,两步分化法和适当干燥处理能够提高愈伤组织的分化效率,6品种愈伤组织分化率均在50%-90%之间.初步建立了6个杂交籼稻亲本品种成熟胚愈伤组织的再生体系,为以后遗传转化奠定基础.
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丹参组织培养及其再生体系的建立与优化
目的 优化丹参组织培养条件,为丹参的良种快速繁殖、遗传转化等研究提供参考.方法 以两种不同基因型的丹参种子为对象,研究了外源激素对丹参种子萌发的影响;以不同基因型的丹参无菌苗叶片为外植体,研究了灭菌方法和植物激素对丹参愈伤组织及丛生芽的诱导、分化和生根的影响.结果 (1)1.0 mg/L的6-BA对促进丹参种子萌发有效.(2)外植体的升汞消毒时间以5 min为佳.(3)6-BA0.5 mg/L对丹参从生芽的诱导效果好,而在诱导愈伤形成方面,处理NAA0.2 mg/L+6-BA1.0 mg/L对丹参愈伤组织的诱导效果好.结论 不同基因型外植体诱导生根所需的条件不尽相同,需要根据材料优化 组培条件.通过激素的配合使用,筛选出丹参愈伤组织诱导、分化和组培苗生根的佳培养基.
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红花高效再生体系的建立
目的 筛选红花不定芽高效诱导条件,结合红花茎尖微嫁接技术,解决转基因红花再生效率低的问题.方法 以新疆塔城裕民无刺红花的子叶作为外植体,子叶—愈伤组织—不定芽分化—伸长—生根/嫁接,分别对红花不定芽高效诱导培养基、伸长培养基和生根培养基进行筛选.结果 确定了不定芽分化培养基:MS +1.0mg/L TDZ+ 0.5mg/L NAA,不定芽伸长培养基:MS+1％蔗糖,生根培养基:White+3mg/L IBA +AgNO3 10mg/L +2％蔗糖+0.2g/L活性炭,生根率为12.5％;以14d红花实生苗做砧木,劈接法嫁接再生植株的成活率为53.3％.结论 本研究采用不定芽高效诱导与茎尖微嫁接技术相结合的方法,成功的获得了再生植株.
